人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子shRNA對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：本研究旨在(1)運(yùn)用已構(gòu)建好的VEGFshRNA真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系SMMC-7721，檢測(cè)其對(duì)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721表達(dá)VEGF蛋白的抑制能力；(2)通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)染VEGFshRNA真核表達(dá)載體前后肝癌細(xì)胞系SMMC-7721的增殖及細(xì)胞的克隆形成能力的變化，探討VEGFshRNA對(duì)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721增殖的影響；(3)通過(guò)觀察VEGFshRNA真核表達(dá)載體對(duì)裸鼠的負(fù)瘤局部注射后負(fù)瘤的生長(zhǎng)變化，探討VEGFsh

2、RNA對(duì)肝細(xì)胞癌瘤體的影響。 方法：(1)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達(dá)載體和VEGFshRNA真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721，ELISA法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721VEGF蛋白表達(dá)水平；(2)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達(dá)載體和VEGFshRNA真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721，流式細(xì)胞儀對(duì)轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細(xì)

3、胞系SMMC-7721進(jìn)行細(xì)胞周期分析；(3)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達(dá)載體和VEGFshRNA真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721，MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721生長(zhǎng)曲線變化；(4)用150mMNaCl、nosilienceshRNA真核表達(dá)載體和VEGFshRNA真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721，軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組人肝癌細(xì)胞系S

4、MMC-7721單細(xì)胞克隆形成能力；(5)制備負(fù)瘤裸鼠，PBS、nosilienceshRNA真核表達(dá)載體和VEGFshRNA真核表達(dá)載體分別進(jìn)行腫瘤局部注射，觀察腫瘤生長(zhǎng)變化。 結(jié)論：(1)VEGFshRNA能有效的抑制人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721VEGF蛋白表達(dá)水平； (2)VEGFshRNA使細(xì)胞G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢，單個(gè)細(xì)胞的克隆形成能力明顯減弱；(3)VEGFshRNA使裸鼠腫瘤生長(zhǎng)變