常氧和低氧條件下,人喉鱗癌細胞分泌的血管內(nèi)皮生長因子對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的:頭頸腫瘤同其它大多數(shù)實體腫瘤一樣,瘤體內(nèi)的部分細胞處于缺氧環(huán)境之中。實體腫瘤持續(xù)性生長和轉(zhuǎn)移需要有新生血管的形成,以新生血管為靶點對實體腫瘤進行生物學治療已成為近些年來新的研究熱點。本實驗利用人喉鱗癌(Hep-2)細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human UmbilicalVein Endothelia Cell,HUVEC),研究在簡單模擬實體瘤內(nèi)部常氧和低氧條件(Hypoxia Inducible Factor1 alpha,HIF

2、-1α)下,與喉鱗癌血管生成相關(guān)的三個指標VEGF(vascular endothelial growth factor),Flt-1(vascularendothelial growth factor receptor1),KDR(vascular endothelial growthfactor receptor2)的表達,探討各個蛋白在喉鱗癌轉(zhuǎn)移過程中的確切作用,為頭頸腫瘤的治療奠定實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　

3、1、Hep-2細胞培養(yǎng)于含10％新生小牛血清、青霉素(100U/mL)、鏈霉素(100μg/mL)的RPMI-1640培養(yǎng)基中,常規(guī)傳代培養(yǎng),置于37℃,5％CO2,20％O2(常氧)或37℃,5％CO2,2％O2,93％N2(低氧)的培養(yǎng)箱中。
　　 2、待Hep-2細胞進入對數(shù)生長期后,將細胞分為2組:A組(常氧24h組)、B組(低氧24h組)。收集各組細胞培養(yǎng)上清,用于刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞生長。免疫細胞化學染色檢測人臍靜脈

4、內(nèi)皮細胞Fit-1、KDR蛋白表達。MTT法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖情況。
　　 3、待Hep-2細胞進入對數(shù)生長期后,將細胞分為2組:A組(常氧3h組、常氧6h組、常氧12h組、常氧24h組、常氧48h組)、B組(低氧3h組、低氧6h組、低氧12h組、低氧24h組、低氧48h組)。收集各組細胞及其培養(yǎng)上清,ELISA法檢測各組細胞及其培養(yǎng)上清VEGF蛋白的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫細胞化學結(jié)果.Fl

5、t-1、KDR蛋白主要位于人臍靜脈內(nèi)皮細胞胞漿和胞核,呈棕黃色,且低氧48h上清刺激組高于常氧48h上清刺激組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、MTT結(jié)果:Hep-2細胞常氧上清和低氧上清均能刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞生長。低氧上清組四個時間組(48h、72h、96h、120h)刺激效果均高于常氧組相應(yīng)各時間(48h、72h、96h、120h),差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3、ELISA結(jié)果:VEG