MiR-145抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究microRNA-145(miR-145)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響;探尋miR-145可能通過調(diào)控ADAM17進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤血管生成的作用機(jī)制。
　　方法:通過轉(zhuǎn)染miR-145模擬物和無意義的陰性對(duì)照小RNA序列進(jìn)入人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-145模擬物的實(shí)驗(yàn)組和轉(zhuǎn)染無意義的陰性對(duì)照小RNA序列的對(duì)照組的HUVECs的

2、增殖能力,Transwell小室檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組HUVECs的遷移能力。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)預(yù)測(cè)的miR-145候選靶基因ADAM17的mRNA表達(dá)水平,并通過免疫印跡(Western blot)從蛋白水平檢測(cè)ADAM17的表達(dá)。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染48h后,轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照小RNA序列組的吸光度(A值)(0.44±0.01)明顯高于轉(zhuǎn)染miR-145模擬物組的A值(0.34±0.01)(P<0.01);轉(zhuǎn)

3、染72h后,轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照小RNA序列組A值(0.86±0.05)也明顯高于轉(zhuǎn)染miR-145模擬物組的A值(0.60±0.09)(P<0.01)。轉(zhuǎn)染無意義的陰性對(duì)照小RNA序列組的HUVECs遷移穿過transwell小室膜的細(xì)胞數(shù)(205±30個(gè))明顯多于轉(zhuǎn)染miR-145模擬物組穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)(135±6個(gè))(P<0.05)。轉(zhuǎn)染miR-145模擬物組較轉(zhuǎn)染無意義的陰性對(duì)照小RNA序列組的ADAM17基因的蛋白水平和mRNA均