牙齦卟啉單胞菌對人臍靜脈血管內皮細胞的生物學效應.pdf

1、近年來，牙周病與心血管疾病的關系逐漸受到人們的重視，流行病學研究表明牙周病與心血管疾病密切相關，牙周病可能是動脈粥樣硬化的危險因素之一。動脈粥樣硬化是一種波及大、中型血管的疾病，現(xiàn)在普遍認為免疫反應和炎癥反應在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起一定作用。近期研究表明，冠心病的發(fā)生發(fā)展機制與感染引發(fā)的免疫反應密切相關。牙周病是人類最常見的感染性疾病之一，其導致的局部和全身免疫反應目前已被認為是發(fā)病的主要病理機制。大量的流行病學調查資料表明，冠心

2、病和外周動脈粥樣硬化的患者口腔衛(wèi)生不良率和牙周炎患病率均較高?；A研究已經顯示，脂多糖-單核細胞-細胞因子（前列腺素E2、血栓素A2、白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子α）之間的相互作用可能是牙周炎和動脈粥樣硬化相互聯(lián)系的生物學基礎。因此，本研究旨在從細胞生物學的角度入手，通過培養(yǎng)人臍靜脈血管內皮細胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs），與牙齦卟啉單胞菌（Porphysomanasgingi

3、valis,P.g）共同孵育，觀察牙齦卟啉單胞菌對人臍靜脈血管內皮細胞生物學活性的影響和分析關鍵細胞因子含量的變化，從而為牙周炎與冠心病之間的相關發(fā)病機制提供佐證。
　　方法：經消化法培養(yǎng)獲得人臍靜脈血管內皮細胞，厭氧培養(yǎng)獲得牙齦卟啉單胞菌，通過MTT法檢測牙齦卟啉單胞菌對血管內皮細胞增殖的影響，凋亡試劑盒檢測牙齦卟啉單胞菌對血管內皮細胞凋亡的影響，掃描電鏡和透射電鏡觀察牙齦卟啉單胞菌對血管內皮細胞結構的影響。ELISA法檢測牙齦

4、卟啉單胞菌對人臍靜脈血管內皮細胞分泌IL-18和CRP的影響。
　　結果：1．P.g和大腸桿菌LPS均能抑制HUVECs的增殖（P＜0.02），且P.g對HUVECs的抑制作用較大腸桿菌LPS更為明顯（P＜0.05）。P.g感染HUVECs3h后即可見部分細胞黏附性下降，極少部分細胞開始脫落固縮。隨著時間的延長，這種作用更加明顯，24h后凋亡檢測顯示，正常細胞組單個高倍視野下見一個或是無細胞凋亡，平均凋亡率＜2％。而P.g感染組可

5、見部分細胞凋亡，計算三個高倍視野，細胞平均凋亡率為20％左右。通過掃描電鏡和透射電鏡對P.g侵入HUVECs的觀察顯示，P.g的主要菌毛在侵襲和黏附內皮細胞過程中起重要作用，P.g通過胞吞途徑實現(xiàn)對內皮細胞的侵入。
　　2．HUVECs自身表達少量的IL-18和C反應蛋白；P.g劑量依賴性增強HUVECs產生IL-18蛋白和C反應蛋白的水平，IL-18蛋白水平和C反應蛋白的水平在P.g刺激后的4h開始增加，在8h、12h和24h繼

6、續(xù)增加，且相同濃度作用下HUVECs分泌CRP的量明顯高于其分泌IL-18的量。P.gATCC33277、P.g381均可以誘導HUVECs分泌IL-18、CRP，其分泌的量明顯高于空白對照組(P＜0.05)，但P.gATCC33277、P.g381之間誘導分泌的量無明顯差別。
　　結論：P.g能明顯抑制HUVECs的增殖，增加HUVECs的凋亡；P.g可能通過胞吞途徑實現(xiàn)對內皮細胞的侵入。P.g劑量和時間依賴性增強HUVECs表