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文檔簡介
1、目的:
觀察波動(dòng)性高糖在體外誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical veinendothelial cell HUVEC)損傷作用,研究別嘌呤醇對損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用,并探討其機(jī)制。
方法:
1、高糖及波動(dòng)性高糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用實(shí)驗(yàn)分為:A、正常對照組(恒定加入5.5mmol/LGlu);B、7.8mmol/LGlu組(恒定加入7.8mmol/LGlu);C、5
2、.5mmol/L/7.8mmol/LGlu組(每24h輪換加入5.5mmol/LGlu或7.8mmol/LGlu);D、14.5mmol/LGlu組(恒定加入14.5mmol/LGLU);E、5.5mmol/L/14.5mmol/LGlu組(每24h輪換加入5.5mmol/LGlu或14.5mmol/LGlu);F、20mmol/LGlu組(恒定加入20mmol/LGlu);G、5.5mmol/L/20mmol/LGlu組(每24h輪換
3、加入5.5mmol/L或20mmol/LGlu),各組分別與HUVEC孵育5天,測定各組細(xì)胞液中的細(xì)胞活力(MTT)指標(biāo)。測定正常對照組、高糖及波動(dòng)性高糖損傷組細(xì)胞上清液中丙二醛(MDA)的含量、SOD(超氧化物岐化酶活力)、一氧化氮(NO)的含量、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)含量及細(xì)胞凋亡率,并在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
2、別嘌呤醇對高糖及波動(dòng)性高糖損傷的HUVEC的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)分為(1)波動(dòng)性高糖損傷對照組(
4、5.5mmol/L/20mmol/LGlu波動(dòng)性高糖組);(2)別嘌呤醇保護(hù)組(濃度分別為0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L);(3)維生素C陽性對照組(濃度為100mg/L)。不同濃度別嘌呤醇及維生素C先與HUVEC孵育5h,再加入5.5mmol/L/20mmol/LGlu波動(dòng)性高糖組誘導(dǎo)損傷,測定各組細(xì)胞上清液中MDA、SOD、NO、ICAM-1含量及細(xì)胞凋亡率。
結(jié)果:
1、波動(dòng)
5、性高濃度葡萄糖與恒定性高濃度葡萄糖均可導(dǎo)致HUVECs出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學(xué)變化。波動(dòng)性高濃度葡萄糖組的凋亡率高于恒定性高濃度葡萄糖組(P<0.05)。5.5mmol/LGlu或7.8mmol/LGlu葡萄糖組凋亡率與對照組相比無明顯差異(P>0.05)。培養(yǎng)液中SOD、NO的含量在波動(dòng)性高濃度葡萄糖組與恒定性高濃度葡萄糖組均較對照組降低(P<0.05),波動(dòng)性高濃度葡萄糖組降低最為明顯(P<0.05);培養(yǎng)液中MDA及ICAM-1的含量在波
6、動(dòng)性高濃度葡萄糖組與恒定性高濃度葡萄糖組均較對照組升高(P<0.05),而波動(dòng)性高濃度葡萄糖組升高最為明顯(P<0.01)。
2、別嘌呤醇(0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L)藥物保護(hù)組中的細(xì)胞凋亡率低于5.5mmol/L/20mmol/LGlu波動(dòng)性高糖組,其中以0.3mmol/L更為明顯(P<0.01),細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD、NO的量均較5.5mmol/L/20mmol/LGlu波動(dòng)性高糖組增高,
7、其中以0.3mmol/L別嘌呤醇組更為明顯(P<0.01),藥物保護(hù)組細(xì)胞培養(yǎng)液中合成MDA、ICAM-1較波動(dòng)性高糖組降低,且在一定濃度范圍內(nèi)(0.05mmol/L~0.2mmol/L)呈濃度依賴性(P<0.05)。
結(jié)論:
1、高糖及波動(dòng)性高糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞均具有損傷作用,且波動(dòng)性高糖組較恒定性高糖組更易促發(fā)培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
2、波動(dòng)性高糖體外誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷更為嚴(yán)重的機(jī)
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