波動性高糖對人臍靜脈內(nèi)皮細胞生存和凋亡及ICAM-1和TNF-α表達的影響.pdf

1、目的：探討波動性與持續(xù)性高糖對人臍靜脈內(nèi)皮細胞生存和凋亡的影響及對細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和腫瘤壞死因子(TNF-α)表達的影響，并探索其機制。 方法：以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECS)為研究對象，實驗分為三組：正常對照組(5.5mmol/L)、持續(xù)高糖組(25 mmol/L)、波動高糖組(5.5/25 mmol/L，白天三小時高糖兩小時正常濃度葡萄糖波動三次，高糖過夜)，前兩組每隔24小時換液一次，分別在24h、48

2、h、72h通過顯微鏡觀察其各種糖濃度條件下細胞形態(tài)的變化，并通過MTT，AnnxenV-FITC檢測細胞生存率、凋亡率及細胞周期。通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞在各種糖濃度條件下24h、48h、72h ICAM-1及TNF-α的表達。 結(jié)果： 1)顯微鏡下細胞形態(tài)的變化：正常對照組培養(yǎng)24h、48h、72h內(nèi)皮細胞形態(tài)無明顯差異，24h高糖組細胞與正常血糖組增殖無明顯差異，波動組出現(xiàn)凋亡細胞。培養(yǎng)48

3、h高糖組細胞凋亡率增高，且細胞變得狹長，波動組細胞凋亡數(shù)更多．培養(yǎng)72h顯微鏡觀察并攝片顯示高糖組出現(xiàn)大量巨大細胞，形態(tài)狹長呈凋亡狀態(tài)，波動組內(nèi)皮細胞和高糖組相比各時段細胞凋亡數(shù)更多，差別明顯，形態(tài)雜亂不一，多數(shù)細胞由原來的飽滿梭形變?yōu)楠M長或不規(guī)則形，隨著時間延長這種現(xiàn)象更明顯。 2)MTT檢測結(jié)果：持續(xù)高糖組、波動高糖組24h細胞生存率分別為：(98±0.094)％、(83±0.163)％，48h分別為(85±0.287)％、

4、(71±0.287)％，72h分別為(71±0.249)％、(58±0.478)％。各個時間段持續(xù)高糖條件下細胞生存率低于正常濃度，而波動性高糖條件下細胞生存率又低于持續(xù)高糖組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，且呈時間-效應(yīng)關(guān)系。 3)流式細胞儀檢測結(jié)果：72h正常對照組、持續(xù)高糖組、波動高糖組細胞凋亡率分別為：6.6％、7.9％、18.8％，與正常對照組和持續(xù)高糖組相比，波動高糖組的凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.

5、001)，而持續(xù)高糖組與正常對照組相比，無明顯差異(p＞0.05)。各濃度葡萄糖作用于HUVEC72h后，波動組較高糖組G0/G1期細胞百分比增加，與持續(xù)高糖組比較，有顯著差異(P＜0.001)，而S和G2/M期比例降低，但差異不顯著(P＞0.05)，而持續(xù)高糖組G0/G1期細胞與對照組比較差異不顯著(P＞0.05)。 4)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ABC-ELISA)檢測ICAM-1的濃度結(jié)果：24h正常組、高糖組、波動組分別

6、為：6.144±0.170ng/mL、7.074±0.203ng/mL、9.155±0.900ng/mL，波動組與正常對照組和高糖組相比，均有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.001)，高糖組與正常對照組相比濃度有所升高，但無明顯差異(p＞0.05)。48h的濃度分別為：6.117±0.372ng/ml、9.258±0.140ng/mL、11.186±0.457ng/mL，72h的濃度分別為：6.164±0.394ng/mL、10.718±0.836

7、ng/mL、12.578±0.498ng/mL，兩組內(nèi)兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)。且正常組各個時間段比較無明顯差異，高糖組與波動組各自組內(nèi)各個時間段比較，24h與48h、72h相比有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，而48h與72h相比差異不顯著(P＞0.05)。 5)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測TNF-α的濃度結(jié)果：24h正常組、高糖組、波動組分別為：368.900±31.017pg/mL、400.047±

8、50.590pg/mL、1016.713±283.860pg/mL；48h分別為：371.383±24.008pg/mL、444.360±29.457pg/mL、1326.200±228.035pg/mL；72h分別為376.470±19.332pg/mL、513.343±33.812pg/mL、1782.330±767.02pg/mL。三個時間段波動組與正常組、高糖組相比顯著升高，均有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，高糖組與正常組相比有所