硫酸鎂對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞放射損傷分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　探究經(jīng)4Gy X射線照射后的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），硫酸鎂對其細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率的影響，而且探討分析其可能的分子機(jī)制。同時研究硫酸鎂對HUVEC中抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響。
　　方法：
　　1.選取符合實驗要求的HUVEC，采用流式細(xì)胞儀檢測硫酸鎂對經(jīng)X射線照射后不同時間HUVEC細(xì)胞周期分布的影響；周期蛋白CyclinB1采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡法檢測。
　　

2、2.HUVEC細(xì)胞凋亡率的測定，采用膜聯(lián)蛋白雙染法（Annexin V/PI）；Bcl-2、P53蛋白采用免疫印跡法檢測；Bcl-2 mRNA的檢測則采用Real Time-PCR法。
　　3.IκB-α蛋白的表達(dá)，使用免疫印跡法測定其變化；IκB-αmRNA的表達(dá)，使用Real Time-PCR法測定其變化。
　　4.數(shù)據(jù)均選用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表現(xiàn)，使用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件，t檢驗對比組間差異。P<0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)

3、意義。
　　結(jié)果：
　　1.前期試驗結(jié)果顯示：對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞而言，硫酸鎂的濃度為1.25mg/mL時，是無毒性的，且X射線照射后，該濃度的硫酸鎂能使細(xì)胞的存活率增加[26]。
　　2.經(jīng)X射線照射后，HUVEC會出現(xiàn)G2/M期阻滯，而1.25mg/mL硫酸鎂能使其阻滯程度降低。流式細(xì)胞術(shù)和western blot檢測均提示：較單純照射組相比，照射加藥組24h CyclinB1蛋白表達(dá)量有一定的升高。
　　

4、3.與空白對照組相比，X射線照射組細(xì)胞凋亡率均有不同程度的增加，照射加藥組與單純照射組比較，HUVEC細(xì)胞凋亡率增加，提示硫酸鎂的濃度在1.25mg/mL時，對X射線照射后的HUVEC，可能促進(jìn)其凋亡。
　　4.Real-Time PCR結(jié)果顯示，X射線增加抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表達(dá)，而1.25mg/ml硫酸鎂能降低其表達(dá)水平；免疫印跡法提示單純照射48h、72h后，Bcl-2蛋白的表達(dá)增加，1.25mg/mL硫酸鎂能降

5、低Bcl-2蛋白的表達(dá)；免疫印跡法檢測提示單純照射72h后，蛋白P53表達(dá)量明顯增加；與單純照射組相比，照射72h后HUVEC的P53蛋白的表達(dá)，硫酸鎂可以促進(jìn)其蛋白水平的增加。
　　5.Real Time PCR檢測提示，X射線能促進(jìn)HUVEC中IκB-αmRNA的表達(dá)，而1.25mg/mL硫酸鎂作用后，能促使其表達(dá)減少；western blot法提示單純照射24h、48h后，IκB-α蛋白的表達(dá)增加，72h IκB-α的表達(dá)下