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1、目的:觀察恩度對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)遷移及miR-126、miR-221、miR-222表達(dá)的影響,并初步探討恩度通過調(diào)控microRNAs發(fā)揮抗血管生成的作用機(jī)制。
方法:采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),測(cè)定50、100、200、500ng/ml恩度對(duì)HUVECs及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)誘導(dǎo)下HUVECs 遷移的影響;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定
2、量RT-PCR技術(shù),檢測(cè)25、50、100、200、500ng/ml恩度對(duì)HUVECs干預(yù)前及干預(yù)1/2、1、2、4、8h后miR-126、miR-221及miR-222表達(dá)水平,并采用 2-△△CT法計(jì)算相對(duì)表達(dá)的倍數(shù)變化,以反映恩度對(duì)microRNAs表達(dá)的影響。
結(jié)果:①不同濃度恩度均具有抑制HUVECs遷移的效應(yīng),且可下調(diào)VEGF對(duì)HUVECs的促遷移作用,并呈劑量依賴性;② miR-126、miR-221、miR
3、-222在HUVECs中均高表達(dá);③恩度顯著下調(diào)miR-126的表達(dá)(0.07 0.01~0.56 0.04);相反,恩度明顯上調(diào)miR-221(1.450.06~5.12 0.48)及miR-222(1.42 0.19~6.68 1.51)的表達(dá);干預(yù)前后,miR-126、miR-221及miR-222表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);④在所觀察范圍內(nèi),恩度對(duì)miR-126、miR-221、miR-222的表達(dá)尚無時(shí)間及濃度依
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