普萘洛爾、平陽霉素對臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡及VEGF表達(dá)影響的體外實驗研究.pdf

1、 目的：血管瘤是一種常見的新生兒先天性的良性腫瘤,主要來源于胚胎發(fā)育過程中殘余的胚胎或血管內(nèi)皮細(xì)胞,分為真性血管瘤與脈管畸形。真性血管瘤具有血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖的特點(diǎn),口腔頜面部好發(fā),80%可以隨年齡增長,到2歲以后可以自行消退,但仍有近20%的血管瘤不能消退。目前對血管瘤的治療沒有統(tǒng)一有效簡單的方案。2008 年,法國醫(yī)生 Leaute-Labreze等偶然發(fā)現(xiàn)口服普萘洛爾能促進(jìn)血管瘤消退,但是到目前為止,普萘洛爾治療血管瘤的機(jī)制尚

2、不清楚。
本實驗以離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為模型,通過體外試驗檢驗普萘洛爾對血管內(nèi)皮細(xì)胞生長、凋亡、生長因子表達(dá)的影響作用。Caspase-3是細(xì)胞凋亡的核心控制凋亡蛋白；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子參與促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移、增加血管通透性,它可以刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管型的形成；故本實驗研究臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在普萘洛爾、平陽霉素作用下的存活率、Caspase-3及血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)變化的影響,并用經(jīng)典的抗腫瘤藥物平陽

3、霉素作為陽性對照,為普萘洛爾治療血管瘤的機(jī)理以及治療前景提供理論依據(jù)。方法：以HUVEC為模型,分別在培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中加入不同濃度的普萘洛爾、平陽霉素、空白對照,藥物濃度梯度為 128ug/ml, 64ug/ml,32ug/ml,16ug/ml,8ug/ml,4ug/ml,比較兩種藥物作用下細(xì)胞的生存與增殖能力；采用MTT法檢測藥物作用下細(xì)胞的存活率,蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)法檢測比較藥物作用下凋亡蛋白Casepa

4、se-3的表達(dá)情況；酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)法測定比較比較生長因子 VEGF 蛋白的表達(dá)變化。以上實驗結(jié)果數(shù)據(jù)使用SPSS16.0軟件統(tǒng)計分析；結(jié)果：1、對照組、平陽霉素組、普萘洛爾組在48h時無明顯差異性(P>0.05)；在24h時出現(xiàn)了藥物組同對照組比較細(xì)胞的增殖差異明顯(P<0.05),其中平陽霉素組抑制率明顯高于普萘洛爾；在濃度低于 128ug/ml 時,平陽霉素抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖率不隨濃度增加而增強(qiáng),普萘洛爾組抑制細(xì)

5、胞增殖率隨藥物濃度的增加,抑制率明顯增強(qiáng)。2、對照組、平陽霉素組、普萘洛爾組血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡蛋白Caspase-3均有表達(dá),平陽霉素組表達(dá)量最高,普萘洛爾次之,對照組較少。3、對照組、平陽霉素組、普萘洛爾組在24h的時相點(diǎn)VEGF表達(dá)量有明顯差異(P<0.05),普萘洛爾、平陽霉素均能明顯抑制生長因子VEGF蛋白表達(dá),普萘洛爾抑制作用與平陽霉素?zé)o差異。結(jié)論：HUVEC在普萘洛爾的作用下表現(xiàn)出了細(xì)胞增殖能力的減低,VEGF蛋白表達(dá)明顯降