尿酸與人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞功能的體外研究.pdf

1、目的：通過不同濃度尿酸(UA)對人體臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)的體外刺激，測定氧化產(chǎn)物ROS和抗氧化反應中人內(nèi)皮細胞一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA的表達情況，初步測定體外一定濃度尿酸刺激血管內(nèi)皮細胞一定時間后，對內(nèi)皮細胞功能的影響。 方法：MTT細胞活力檢測實驗測定不同時間經(jīng)不同濃度尿酸培養(yǎng)HUVEC之間活力的差異；共聚焦熒光顯微鏡檢測不同濃度尿酸刺激HUVEC 48小時后細胞ROS的表達；流式細胞儀檢測不同濃度尿酸刺激H

2、UVEC 48小時后細胞ROS的表達；RT-PCR檢測不同濃度尿酸刺激HUVEC 48小時候后eNOS mRNA的表達水平；Real-Time PCR檢測不同濃度尿酸刺激HUVEC 48小時候后eNOS mRNA的表達水平。 結(jié)果：在不同濃度尿酸(0、S、10、20和30mg/dL)中培養(yǎng)不同時間(8、12、24和48h)之后，MTT檢測發(fā)現(xiàn)第8h和12h時各個尿酸濃度組HUVEC的活力之間沒有差異，第24h和48h時各個尿酸濃

3、度組HUVEC的活力較對照組有顯著降低(P<0.05)。HUVEC經(jīng)體外不同濃度尿酸(0、5、10、20和30mg/dL)刺激48h后，經(jīng)激光共聚焦顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)HUVEC胞漿中DCFDA探針標記的ROS表達灰度強度與尿酸刺激濃度呈顯著正相關(P<0.001)。同時HUVEC經(jīng)體外不同濃度尿酸(0、5、10、20、30mg/dL)刺激48h后，采用RT-PCR檢測細胞中eNOS mRNA的表達，發(fā)現(xiàn)eNOS mRNA的表達強度與尿酸培養(yǎng)

4、濃度亦呈顯著正相關(P<0.05)。 結(jié)論：初步研究發(fā)現(xiàn)，體外HUVEC在不同濃度尿酸中培養(yǎng)不同時間后，MTT法測得第24h和48h時各個尿酸濃度組HUVEC的活力較對照組有顯著降低。體外實驗中，隨著外源性尿酸濃度升高，HUVEC胞漿中ROS的表達程度升高，提示高濃度外源性尿酸刺激對HUVEC內(nèi)皮細胞功能可能具有損傷作用。體外HUVEC被不同濃度尿酸刺激后eNOS mRNA表達增加，不排除是機體對尿酸激活ROS后產(chǎn)生的抗氧化反應