堿性成纖維生長因子對脂肪干細胞向血管內皮遷移的影響.pdf

1、研究目的：
　　本實驗目的在于觀察外源性堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)對植入小鼠皮下的人脂肪來源干細胞(human adipose-derived stem cells，hASCs)-透明質酸鈉復合物中人脂肪來源干細胞向血管內皮遷移情況的影響，由此探究一種較為理想的軟組織填充方案。
　　材料與方法：
　　由鄭大五附院行脂肪抽吸術的健康求美者獲得脂肪混懸液，用

2、膠原酶消化混懸液后，從中分離、提取出hASCs，進行體外培養(yǎng)、傳代擴增，用顯微鏡觀察細胞的形態(tài)，用臺盼藍染液對其進行染色后行hASCs計數(shù)，再用流式細胞儀對細胞表型進行鑒定。將傳代至第三代的細胞行成脂誘導，并行油紅O染色對其進行成脂鑒定。用cm-dil標記第三代細胞并在熒光顯微鏡下觀察標記后細胞形態(tài)。取第3代鑒定過后的hASCs進行cm-dil熒光標記，標記后制成5×109L-1的細胞懸液。將bFGF配成2mg/L的工作液。將0.25m

3、l透明質酸鈉凝膠、0.2ml細胞懸液和0.05ml含有bFGF的工作液混合制成實驗組植入物，同時將0.25ml透明質酸鈉凝膠、0.2ml細胞懸液和0.05mlDMEM對照液混合制成對照組植入物，將實驗組、對照組分別植入小鼠背部左、右兩側皮下，每只小鼠均作自身對照。6周后取材，觀察局部注射物吸收情況及組織大體形態(tài)，蘇木精-伊紅染色后觀察組織學形態(tài)，免疫熒光標記后熒光顯微鏡下觀察血管內皮熒光及外源性人脂肪來源干細胞示蹤熒光。觀察并記錄實驗組

4、、對照組同一視野FITC標記血管內皮的綠色熒光和cm-dil標記外源性人脂肪來源干細胞的紅色熒光的重合例數(shù)，并行統(tǒng)計學分析比較兩組差異。
　　結果：
　　1.提取并傳代培養(yǎng)的人脂肪來源干細胞光鏡下形態(tài)為梭形，流式細胞儀檢測其表型符合人脂肪來源干細胞標準，行成脂誘導后7天可在鏡下觀察到大小不一的脂滴，油紅O染色結果為陽性。經(jīng)cm-dil標記后，熒光顯微鏡下可見細胞顯紅色熒光，呈梭形。
　　2.攜帶外源性人脂肪來源干細胞的

5、實驗組、對照組復合物植入小鼠體內后未見排異反應。術后6周剪開背部皮膚，見雙側植入處均無結節(jié)、壞死、液化，無明顯凝膠狀物殘留，雙側軟組織質地無顯著差別。
　　3.蘇木精-伊紅染色后鏡下可見兩組標本性質主要為脂肪組織和疏松結締組織，并可觀察到血管和肌肉組織。實驗組與對照組標本經(jīng)蘇木精-伊紅染色后組織成分鏡下未見明顯差異。
　　4.熒光顯微鏡綠色光源下可見顆粒狀聚集或條帶狀沉積的紅色明亮熒光，藍色光源下可見血管內皮細胞呈綠色熒光，

6、形態(tài)多為血管斷面。綠色光源下隨機選取標記外源性人脂肪來源干細胞的紅色熒光，切換藍色光源觀察有否標記血管內皮的綠色熒光與之重合，結果兩組重合例數(shù)實驗組大于對照組，卡方值x2=4.53，自由度v=1，P＜0.05，差異有顯著性意義。
　　結論：
　　將堿性成纖維生長因子加入人脂肪來源干細胞-透明質酸鈉支架復合物中植入小鼠體內后，堿性成纖維細胞生長因子可促進植入物中的外源性人脂肪來源干細胞向血管內皮遷移，參與血管的構建及新生，加強