肝細胞生長因子對肉雞血管內(nèi)皮祖細胞氧化損傷的逆轉作用.pdf

1、血管內(nèi)皮功能障礙是肺動脈高壓發(fā)生過程中的重要環(huán)節(jié)，其機制主要包括內(nèi)皮損傷、內(nèi)皮修復失效以及血管完整性的破壞。EPCs是一群同時具有祖細胞和內(nèi)皮細胞特征的細胞。EPCs來源于骨髓，在血管損傷時，EPCs被動員入血，并向血管受損部位歸巢，參與血管修復。肝細胞生長因子(HGF)是一種多功能因子，具有強大的促血管形成能力，在內(nèi)皮細胞上充當促有絲分裂和促形態(tài)發(fā)生因子的角色。作為一種內(nèi)源性組織修復因子，HGF也具有抗細胞凋亡的作用。本研究的目的在于

2、建立家禽EPCs分離培養(yǎng)方法并探索HGF對ROS損傷的肉雞外周血EPCs功能的影響。
　　試驗一，肉雞外周血EPCs的分離與鑒定。采用密度梯度離心分離出肉雞外周血單個核細胞，在EGM-2培養(yǎng)基中培養(yǎng)24-48h后去掉未貼壁細胞繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)至7d時采用FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL雙染色鑒定EPCs表型，至14d時采用PCR法檢測EPCs標志CD133、VEGFR-2和CD31的表達，采用MTT法檢測細胞增殖，采用Ma

3、trigel實驗檢測體外管形成能力。結果:EPCs在培養(yǎng)5-7d出現(xiàn)，呈梭形或不定形，能同時被FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL染色，半定量PCR和實時熒光定量PCR能檢測到細胞CD133、CD31以及VEGFR-2的mRNA的表達，但檢測不到CD34的表達，Matrigel實驗證實細胞具有體外管形成的能力。
　　試驗二，HGF對EPCs氧化損傷的逆轉作用。取培養(yǎng)至12d的EPCs，加入16.5mM氧自由基(ROS)發(fā)生器

4、2，2'-偶氮（2-甲基丙基脒）二鹽酸鹽(2-AAPH)孵育4h后，分別加入5、10和20ng/mL HGF并繼續(xù)培養(yǎng)24h，收集細胞，檢測增殖、凋亡以及遷移能力。結果:ROS處理顯著抑制EPCs增殖，誘導EPCs凋亡，并抑制EPCs的遷移。20ng/mL HGF可顯著促進ROS損傷后的EPCs增殖，抑制ROS誘導的EPCs凋亡，提高ROS損傷細胞的遷移能力。
　　結論:
　　1、本研究建立起了肉雞外周血EPCs的分離培養(yǎng)方