TRPV1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移能力的影響及相關(guān)機(jī)制.pdf

1、目的:隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的穩(wěn)步發(fā)展人民生活條件在近年來(lái)也不斷得到改善，但是隨之而來(lái)的高血壓、糖尿病、冠心病等代謝性疾病的發(fā)生率、死亡率卻逐年攀升，其伴發(fā)的腦卒中、心力衰竭、心肌梗塞、腎功能損害以及外周、心臟和中樞動(dòng)脈血管病變嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。在血管的解剖結(jié)構(gòu)中內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成血管內(nèi)壁的屏障，其形態(tài)、功能對(duì)血管疾病有著非常重要的影響，且內(nèi)皮細(xì)胞的損傷已成為血管疾病的啟動(dòng)因素。所以，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能極其影響機(jī)制的研究在心血管病等代謝性疾病的防治方面體現(xiàn)

2、出極其深遠(yuǎn)社會(huì)意義。瞬時(shí)受體電位通道-香草酸亞型1(Transient ReceptorPotential Vanilloid1，TRPV1)可以被我們常用的食品紅辣椒中的辣椒素(Capsaicin)激活，既往大量的研究表明，TRPV1廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)中，其也分布在內(nèi)皮細(xì)胞中，TRPV1激活后可引起鈣離子向細(xì)胞內(nèi)流，使細(xì)胞內(nèi)鈣離子(Intracellular Calcium，[Ca2+]i)濃度升高，長(zhǎng)期激活TRPV1可以使內(nèi)皮細(xì)胞舒

3、張，從而改善內(nèi)皮細(xì)胞和血管功能;TRPV1與蛋白激酶A(Protein Kinase A, PKA)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric-oxideSynthase，eNOS)信號(hào)通路相關(guān)，且PKA細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路與細(xì)胞增殖通路密切聯(lián)系;而磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B信號(hào)通路，即PI3K/AKT信號(hào)通路是經(jīng)典的增殖相關(guān)細(xì)胞信號(hào)傳遞通路。綜上，我

4、們推測(cè)，TRPV1可調(diào)控PI3K/AKT/eNOS通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能、預(yù)防血管疾病。
　　材料和方法:
　　實(shí)驗(yàn)材料:整個(gè)研究由細(xì)胞實(shí)驗(yàn)構(gòu)成。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell，HUVEC)為研究對(duì)象。
　　實(shí)驗(yàn)分組:分為對(duì)照組（Control）、辣椒素組（Capsaicin）、辣椒卓平組(Capsaz

5、epine)、辣椒卓平+辣椒素組（Capsazepine+Capsaicin）、LY294002組(LY294002)、LY294002+辣椒素組(LY294002+Capsaicin)、L-NAME組（L-NAME）、L-NAME+辣椒素組（L-NAME+Capsacin）。
　　1、用免疫熒光染色法觀察TRPV1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的表達(dá);
　　2、應(yīng)用Transewell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組干預(yù)條件干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)

6、皮細(xì)胞(HUVEC)的遷移能力;
　　3、用CCK8試劑盒檢測(cè)各組干預(yù)條件干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的增殖能力;
　　4、用蛋白免疫印跡法檢測(cè)各組干預(yù)條件干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）增殖相關(guān)信號(hào)通路蛋白（AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS）的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、TRPV1在人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中有表達(dá)。
　　2、辣椒素（Capsaicin）激活TRPV1后人靜脈內(nèi)皮

7、細(xì)胞(HUVEC)遷移能力增加;辣椒卓平(Capsazepine)、L-NAME和LY294002干預(yù)處理后人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)遷移能力下降。
　　3、辣椒素(Capsaicin)激活TRPV1后人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖能力增加;辣椒卓平(Capsazepine)、L-NAME和LY294002干預(yù)處理后人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖能力下降。
　　4、辣椒素（Capsaicin）刺激可明顯上調(diào)人靜脈內(nèi)皮細(xì)

8、胞（HUVEC）phospho-AKT、phospho-eNOS蛋白的表達(dá);用PI3K/AKT通道受體拮抗劑LY294002干預(yù)HUVEC，或者用eNOS抑制劑L-NAME干預(yù)后;人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）phospho-AKT、phospho-eNOS蛋白的表達(dá)明顯降低;用PI3K/AKT通道受體拮抗劑LY294002干預(yù)HUVEC，或者用eNOS抑制劑L-NAME干預(yù)后再用辣椒素(Capsaicin)刺激HUVEC，phospho