表面梯度化材料對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞黏附與遷移影響的研究.pdf

1、為探討表面梯度化材料對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附與遷移行為的影響，通過(guò)不同方式體外構(gòu)建材料表面I型膠原蛋白梯度(蛋白密度梯度和圖案化不同曲率和弧度梯度的蛋白基底)，來(lái)研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞在梯度表面的黏附狀態(tài)和運(yùn)動(dòng)趨化性。實(shí)驗(yàn)一通過(guò)連續(xù)堿水解聚乳酸膜制備形成羧基密度，并共價(jià)偶聯(lián)膠原蛋白形成相應(yīng)的蛋白密度梯度。接觸角測(cè)量?jī)x和激光掃描共聚焦顯微鏡分別表征了-COOH密度梯度和膠原蛋白密度梯度，通過(guò)熒光顯微鏡可觀測(cè)到明顯的膠原蛋白梯度，以上結(jié)果證實(shí)了聚乳酸薄膜上通

2、過(guò)連續(xù)堿水解方法制備膠原蛋白梯度的可行性。在低密度和中間密度的膠原蛋白梯度區(qū)域培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的沿著梯度方向的運(yùn)動(dòng)性（凈遷移，趨化指數(shù)，遷移率和細(xì)胞軌跡證實(shí)），然而，內(nèi)皮細(xì)胞在高濃度蛋白密度區(qū)域的運(yùn)動(dòng)與膠原蛋白梯度反向。結(jié)果表明，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)受膠原蛋白梯度趨向，但必須是適宜的利于細(xì)胞黏附的蛋白密度。實(shí)驗(yàn)二基于仿生學(xué)原理，根據(jù)人體內(nèi)不同種類(lèi)和不同口徑（從最細(xì)小的毛細(xì)血管到大動(dòng)脈）的血管厚度和彎曲度不同設(shè)計(jì)出一系列弧度梯度（20 μm,

3、60 μm,100 μm弧度寬度），并運(yùn)用微接觸印刷技術(shù)制備出不同曲率半徑的膠原蛋白基底，掃描電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡檢驗(yàn)PDMS印章表面平整度，激光共聚焦顯微鏡檢驗(yàn)基底蛋白黏附情況和均勻度，細(xì)胞骨架蛋白肌動(dòng)蛋白和粘著斑蛋白染色觀測(cè)細(xì)胞粘附狀態(tài)，活細(xì)胞工作站對(duì)細(xì)胞6h運(yùn)動(dòng)情況進(jìn)行錄像，運(yùn)用相關(guān)軟件測(cè)定20，60，100 μm弧度寬度梯度之間或自身不同曲率半徑之間的細(xì)胞遷移速度和細(xì)胞遷移總位移與凈位移比值。結(jié)果表明:細(xì)胞的黏附狀態(tài)與弧度寬度