初探內(nèi)皮細胞膜微粒（EMPs）于體外對內(nèi)皮細胞功能及凋亡的影響.pdf

1、股骨頭微循環(huán)障礙、血液高凝傾向和小血管阻塞是激素性股骨頭壞死諸多發(fā)病機制中比較重要的機制。內(nèi)皮細胞膜微粒(EMPs)是由內(nèi)皮細胞分泌，磷脂膜包被的微小囊泡結構，具有影響血液凝血系統(tǒng)、血管舒張功能，且與多種內(nèi)皮損傷性血栓及炎癥疾病相關。同時EMPs參與細胞凋亡、活化、炎癥細胞募集等多種病生理過程。 目的：探討體外試驗中，激素對于內(nèi)皮細胞EMPs釋放的影響．探討EMPs對內(nèi)皮細胞自身的影響，包括內(nèi)皮功能和凋亡兩方面，進而初探EMPs

2、在激素相關性股骨頭缺血壞死機制中的作用． 方法：實驗對象：實驗中選擇體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株。實驗刺激物：激素對內(nèi)皮細胞實驗中使用DEX激素，EMPs對內(nèi)皮細胞影響實驗則選擇內(nèi)皮細胞自分泌的EMPs。檢測方法：EMPs和內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)一段時間后倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化，用流式細胞儀檢測EMPs數(shù)量，隨后用Bradford法測BSA(Bovine Serum Albumin)濃度值，判斷內(nèi)皮細胞通透性變化。以Caspa

3、se-3試劑盒和Annexin-V FITC試劑盒測定細胞凋亡狀況，RT-PCR檢測內(nèi)皮細胞凋亡基因的表達。 結果：1.流式細胞儀分析：10mM濃度激素刺激24h，內(nèi)皮細胞釋放EMPs達到最大。2.中、高濃度EMPs對內(nèi)皮細胞通透性產(chǎn)生損傷，低濃度無明顯差異。3.試劑盒檢測結果：高中低濃度EMPs內(nèi)皮細胞Caspase-3、PS活性表達均高于對照。4.Realtime-PCR、RT-PCR分析凋亡基因：高、中濃度EMPs組APA

4、F-1、AIF基因表達較對照增高，低濃度組沒有明顯差異。 結論：1.DEX在10mM，24h條件下刺激內(nèi)皮細胞產(chǎn)生最大量的EMPs2.7.66*104和7.66*103個/ml濃度EMPs對內(nèi)皮細胞通透性可引起損傷，但7.66*102個/mlEMPs則不會對內(nèi)皮產(chǎn)生明顯損傷。3.7.66*104、7.66*103、7.66*102個/ml濃度EMPs均促內(nèi)皮細胞凋亡發(fā)生；Caspase-3、PS活性表達均增高。4.7.66*10