角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的研究.pdf

1、角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的完整和功能上的健全是臨床上評(píng)價(jià)角膜功能的指標(biāo),也是角膜保存質(zhì)量評(píng)定的標(biāo)準(zhǔn).觀察藥物及一些因素對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響離不開角膜內(nèi)皮細(xì)胞的體外試驗(yàn),而體外試驗(yàn)的成功也依賴于良好的角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng).角膜內(nèi)皮盲是角膜病的一種常見病,角膜內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)于角膜生物學(xué)、病理學(xué)、藥理學(xué)以及角膜移植的研究具有重要的意義,也是體外構(gòu)建組織工程化人工角膜的重要研究?jī)?nèi)容之一.該論文通過對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的方法進(jìn)行

2、篩選和優(yōu)化,確定角膜內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法;揭膜培養(yǎng)法:角膜緣內(nèi)1mm揭取角膜內(nèi)皮細(xì)胞層,貼于瓶底,使其貼壁生長,可以獲得六角形單層內(nèi)皮細(xì)胞.不使用Trypsin,避免酶對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷.不需較多材料.消化培養(yǎng)法:材料較多時(shí),采用消化培養(yǎng)法,培養(yǎng)中需控制Trypsin的消化時(shí)間和濃度;接種細(xì)胞易貼壁.組織塊培養(yǎng)法:角膜材料較少,采用組織貼片培養(yǎng)法,方法簡(jiǎn)便易行,細(xì)胞時(shí)間和濃度;接種細(xì)胞易貼壁.組織塊培養(yǎng)法:角膜材料較少,采用組織貼片培養(yǎng)

3、法,方法簡(jiǎn)便易行,細(xì)胞遷出和生長速度較快,避免了Trypsin對(duì)細(xì)胞的損傷,細(xì)胞生長形態(tài)正常.通過研究,確定了角膜內(nèi)皮細(xì)胞最適培養(yǎng)液為DMEM/F12(1:1).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其生長效果較好.角膜內(nèi)皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法:從酶的濃度、酶的用量、酶作用的時(shí)間、洗滌離心等方面進(jìn)行了研究,得到了適合角膜內(nèi)皮細(xì)胞的傳代方法.首次進(jìn)行了促進(jìn)角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長的海洋生物提取物的篩選研究,以解決內(nèi)皮細(xì)胞生長緩慢,傳代困難的問題.角膜內(nèi)皮細(xì)胞在多糖生物膜材料上