人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、目的：國內(nèi)外多項研究初步表明，入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)具有多向分化潛能，已有實驗證明在體內(nèi)、體外不同細(xì)胞因子作用下，可以誘導(dǎo)分化為骨、軟骨和脂肪細(xì)胞，參與組織更新、損傷的修復(fù)和器官的重建。本課題將通過體外培養(yǎng)hMSCs，并通過體外誘導(dǎo)使其向血管內(nèi)皮細(xì)胞方向分化，使目的細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞樣特性，旨在為臨床上骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療缺血性心腦血管疾病以及為血管組織工程提供新的種子細(xì)胞來源。 方法：通過密度梯度離心法分離出成人骨

2、髓單個核細(xì)胞，接著經(jīng)貼壁法獲取hMSCs，體外擴(kuò)增培養(yǎng)并通過流式細(xì)胞儀對其進(jìn)行鑒定。在hMSCs生長培養(yǎng)基(DMEM/F12)中加入血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)，定向誘導(dǎo)hMSCs向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，擴(kuò)增培養(yǎng)后經(jīng)流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定，熒光顯微鏡下觀察誘導(dǎo)后hMSCs的DiI—ac—LDL攝取能力。 結(jié)果：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過24小時的培養(yǎng)，貼壁粘附在培養(yǎng)瓶壁上，

3、換液同時棄去未貼壁細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)，細(xì)胞呈克隆樣生長，12天后細(xì)胞生長接近融合。消化傳代，傳代后細(xì)胞生長速度加快，約5-7天后細(xì)胞生長即融合。傳至第四代后，細(xì)胞生長趨于穩(wěn)定，此時開始進(jìn)行誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)分化24天后，所得細(xì)胞具有攝取Dil—ac—LDL功能。誘導(dǎo)分化同時，分別于第0天、14天和24天用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面的表型CD34、CD45、CD106、HLA—DR，其表達(dá)結(jié)果如下表： 結(jié)論：本實驗探索了體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干