人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外分離培養(yǎng)鑒定試驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】探討建立體外人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法，為冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)后橋靜脈再狹窄機(jī)制和治療的試驗(yàn)研究提供體外血管內(nèi)皮細(xì)胞模型。
　　 【方法】取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院新鮮胎兒臍帶10條，用0.25％胰蛋白酶灌注消化法對(duì)同一根臍帶的兩段靜脈分別消化15min、25min，分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作細(xì)胞計(jì)數(shù)，M199培養(yǎng)基進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。采用差速貼壁法將成纖維細(xì)胞和血液系統(tǒng)細(xì)胞分離去除，進(jìn)行人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞純化。培養(yǎng)一

2、周后采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Ⅷ因子相關(guān)抗原vWF因子，進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定。應(yīng)用SPSS13.0對(duì)消化分離細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，繪制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
　　 【結(jié)果】0.25％胰蛋白酶灌注消化法15min、25min分離的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)分別為（11.7±2.47）×105/ml、（20.5±2.87）×105/ml，t檢驗(yàn)（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。差速貼壁法可以去除成纖維細(xì)胞和血液系統(tǒng)細(xì)胞，純化臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。2