鹽酸去氧腎上腺素和絲裂霉素對(duì)體外培養(yǎng)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞的毒性影響.pdf

1、[目的]:觀察鹽酸去氧腎上腺素和絲裂霉素(MMC)對(duì)體外培養(yǎng)家兔角膜內(nèi)皮的作用，探討臨床應(yīng)用這兩種藥物的可能毒性作用。 [方法]:顯微分離兔角膜后彈力層一內(nèi)皮細(xì)胞層，聯(lián)合貼壁法和(或)消化法培養(yǎng)角膜內(nèi)皮細(xì)胞，利用含小牛血清的高糖DMEM作為培養(yǎng)液，不添加生長因子。培養(yǎng)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞，傳代接種于96孔板，鹽酸去氧腎上腺素設(shè)定為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組0.625mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml，4個(gè)相應(yīng)陰性對(duì)照組；M

2、MC分為6個(gè)實(shí)驗(yàn)組1×10-6mg/ml、1×10-5mg/ml、1×10-4mg/ml、l×10-3mg/ml、l×10-2mg/ml、l×10-1mg/ml，均設(shè)空白對(duì)照2組。不同時(shí)相相差倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化和增殖情況，去氧腎上腺素組于加藥72h后，MMC組于加藥22h后MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況，對(duì)比不同濃度組細(xì)胞吸光度并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。去氧腎上腺素組再次設(shè)定4個(gè)實(shí)驗(yàn)組0.625mg/ml、1.25mg/ml、2.5m

3、g/ml、5mg/ml，在加藥后5min、10min、30min、1h、1h30min更換實(shí)驗(yàn)組的培養(yǎng)液，進(jìn)一步觀察細(xì)胞的空泡變性能否逆轉(zhuǎn)。 [結(jié)果]:培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞呈單層密集生長，形態(tài)為六角形或多邊形，具有活體細(xì)胞的形態(tài)特征。去氧腎上腺素5mg/ml實(shí)驗(yàn)組加藥4h后細(xì)胞出現(xiàn)空泡，2.5mg/ml組加藥5h后細(xì)胞出現(xiàn)空泡，1.25mg/ml組加藥后10h出現(xiàn)明顯空泡，加藥12h后3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均顯示明顯空泡，30h后2.5mg

4、/ml、5mg/ml實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞部分死亡，60h后1.25mg/ml、2.5mg/ml實(shí)驗(yàn)組原空泡變細(xì)胞大部分死亡，72h后3個(gè)濃度組幾乎全部死亡。0.625mg/ml濃度組和4個(gè)陰性對(duì)照組均未出現(xiàn)形態(tài)學(xué)變化。1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞吸光度值與空白及陰性對(duì)照的差異經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有極顯著意義(P＜0.001)；0.625mg/ml試驗(yàn)組、4個(gè)陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。去

5、氧腎上腺素接觸內(nèi)皮細(xì)胞后，5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml濃度組5min以內(nèi)換液，細(xì)胞均未出現(xiàn)空泡變，加藥后6h再次換液，已出現(xiàn)的細(xì)胞空泡變性減輕，所有換液復(fù)孔細(xì)胞均未死亡。MMC組：加藥后1h、2h、3h、5h各組細(xì)胞形態(tài)變化不明顯，1×10-2mg/ml、1×10-1mg/ml實(shí)驗(yàn)組8h后細(xì)胞部分變圓，20h后細(xì)胞幾乎全部變圓死亡，其余各組變化不明顯。1×10-6mg/ml、1×10-5mg/ml組和空白對(duì)照組經(jīng)統(tǒng)