TRPV1調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的:
　　慢性高血壓過程可引起血管中膜及內(nèi)膜增厚，血管壁腔比值增加，并最終導(dǎo)致肥厚性內(nèi)向性血管重構(gòu)（vascular remodeling，VR）。關(guān)于血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmooth muscle cells，VSMCs)的研究眾多，其異常增殖是血管重構(gòu)的重要病理機(jī)制之一。正常情況下的VSMCs位于動(dòng)脈中層，表達(dá)多種收縮蛋白以發(fā)揮其收縮功能，并不具備增殖和遷移的能力。但在持續(xù)性高血壓等因素刺激下，VSMCs可

2、發(fā)生活化，進(jìn)而獲得增殖和遷移能力，分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)，啟動(dòng)了血管重構(gòu)過程。重構(gòu)的血管反過來促進(jìn)高血壓的發(fā)展，進(jìn)而影響心、腦、腎等重要靶器官的血供導(dǎo)致靶器官損害。因此，有效抑制VSMCs異常增殖對于防治高血壓動(dòng)脈重構(gòu)及靶器官損害具有重要意義。
　　近年來，瞬時(shí)受體電位香草醛亞家族1（transient receptor potential vanilloid1，TRPV1）在高血壓發(fā)生、發(fā)展中的作用逐漸受到重視。TRPV1為瞬時(shí)受體

3、電位（transient receptor potential，RP）家族中V亞家族中的一個(gè)成員，在脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、VSMCs、心肌成纖維細(xì)胞等中均有表達(dá)，能被辣椒素強(qiáng)效激活。長期食用辣椒素激活TRPV1后可以改善阻力血管的內(nèi)皮舒張功能，降低自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)的血壓。研究發(fā)現(xiàn)，辣椒素激活TRPV1后可以抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖，說明TR

4、PV1對細(xì)胞增殖具有抑制作用。目前，TRPV1對于VSMCs的增殖，特別是高血壓狀態(tài)下的VSMCs增殖的作用尚不清楚。由此，本課題著重探索TRPV1激活是否可以抑制SHR胸主動(dòng)脈VSMCs的增殖進(jìn)而調(diào)控高血壓狀態(tài)下的血管重構(gòu)。
　　PI3K/Akt信號通路參與了細(xì)胞增殖、生長等的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，大麻二酚可以激活結(jié)腸癌細(xì)胞中TRPV1受體，從而抑制由氧化偶氮甲烷誘導(dǎo)的Akt磷酸化過程。因此，我們進(jìn)一步推測，TRPV1激活可能通過抑制

5、PI3K/Akt信號通路抑制高血壓狀態(tài)下VSMCs的增殖，從而改善高血壓的血管重構(gòu)。
　　為了證實(shí)以上假設(shè)，我們的研究分為3部分。第一部分原代培養(yǎng)SHR和WistarKyoto大鼠(WKY)來源的VSMCs并進(jìn)行鑒定。第二部分觀察TRPV1激活對VSMCs增殖的影響。第三部分初步探討TRPV1激活對VSMCs增殖影響的可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)SHR和WKY原代VSMCs用組織塊貼塊法，鑒定VSMCs用細(xì)胞免

6、疫熒光染色;
　　2.細(xì)胞增殖檢測用CCK-8法;
　　3.細(xì)胞蛋白表達(dá)水平檢測用Western blot法。
　　結(jié)果:
　　1.原代培養(yǎng)及鑒定SHR及WKY來源的VSMCs。
　　2.SHR-VSMCs和WKY-VSMCs中均有TRPV1表達(dá)，與WKY-VSMCs相比，SHR-VSMCs中TRPV1蛋白表達(dá)顯著降低;應(yīng)用TRPV1激動(dòng)劑辣椒素可顯著上調(diào)SHR-VSMCs、WKY-VSMCs中TRPV1蛋

7、白的表達(dá)。
　　3.SHR-VSMCs的增殖能力強(qiáng)于WKY-VSMCs;辣椒素可呈劑量依賴性地抑制SHR-VSMCs增殖，TRPV1的拮抗劑iRTX可拮抗辣椒素抗增殖的作用;辣椒素輕度抑制WKY-VSMCs增殖，與對照組相比，沒有顯著差異。
　　4.與WKY-VSMCs相比，SHR-VSMCs中p-Akt水平顯著升高;辣椒素激活TRPV1可顯著降低WKY-VSMCs和SHR-VSMCs中p-Akt水平;TRPV1拮抗劑iRT

8、X，則使WKY-VSMCs、SHR-VSMCs中p-Akt水平升高。
　　5.PI3K的特異抑制劑LY294002，可顯著抑制SHR-VSMCs增殖;同單用辣椒素相比，LY294002+辣椒素組對SHR-VSMCs增殖的抑制作用無明顯差異;對于WKY-VSMCs增殖，LY294002的抑制作用不顯著。
　　6.LY294002組、LY294002和辣椒素組均顯著降低WKY和SHR-VSMCs中p-Akt的水平;LY29400