姜黃素抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究姜黃素對(duì)大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(rVSMC)增殖的影響，篩選一種安全、有效、價(jià)廉的藥物用于血管平滑肌異常增殖性疾病的治療和預(yù)防。方法：體外培養(yǎng)rVSMCs，用不同濃度的姜黃素(Curcumin，Cur)(7.5μM、15μM、30μM)進(jìn)行干預(yù)，設(shè)立空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照(10nM雷帕霉素，Rapamycin)，觀察使用不同濃度姜黃素后的不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)rVSMCs增殖情況的影響，利用光學(xué)顯微鏡觀察rVSMCs形態(tài)學(xué)變化，

2、采用細(xì)胞計(jì)數(shù)及四唑鹽(MTT)檢測(cè)rVSMCs生長(zhǎng)及增殖的情況，利用免疫印記(Western-Blot)方法檢測(cè)姜黃素對(duì)細(xì)胞Ras信號(hào)通路中p-ERK1/2、p-Akt和Caspase-9的影響。 結(jié)果：1.光學(xué)顯微鏡觀察不同藥濃對(duì)rVSMCs生長(zhǎng)的影響： 隨著藥物濃度的增高及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，低、中藥物濃度組主要顯示對(duì)rVSMCs生長(zhǎng)的抑制作用，高濃度組顯示出很強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用及促細(xì)胞凋亡的作用。 2.細(xì)胞計(jì)數(shù)檢

3、測(cè)不同濃度姜黃素對(duì)rVSMCs增殖的影響： (1)空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比，各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。 (2)陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均比空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組明顯降低，具有顯著性差異(p＜0.05)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖抑制率分別為31.8％、91.8％、79.6％。 (3)姜黃素藥物組： ①低濃度姜黃素組24小時(shí)、48小時(shí)的細(xì)胞計(jì)數(shù)

4、結(jié)果與空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，72小時(shí)的計(jì)數(shù)結(jié)果低于空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組(p＜0.05)；三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的增殖抑制率分別為19.9％、13.2％、26.8％；48小時(shí)和72小時(shí)的增殖抑制率遠(yuǎn)低于陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)(p＜0.01)。 ②中濃度姜黃素組24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均比空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組低(p＜0.05)；三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的增殖抑制率分別為48.7％、76.6％、69.2

5、％；48小時(shí)和72小時(shí)的增殖抑制率低于陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)(p＜0.05)。 ③高濃度姜黃素組24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均比空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組明顯降低(p＜0.01)；三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的增殖抑制率分別為58.8％，91.1％，98.3％；48小時(shí)的增殖抑制率與陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)相比沒(méi)有顯著性差異(p＞0.05)，24小時(shí)和72小時(shí)增殖抑制率高于陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)(p＜0.05)。 3.四唑鹽(MT

6、T)檢測(cè)不同濃度姜黃素對(duì)rVSMCs增殖活性的影響： (1)空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比，24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的OD值結(jié)果無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。 (2)陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的OD值結(jié)果均比空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組明顯降低(p＜0.05)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MTT抑制率分別為21.8％、57.4％、66.2％。 (3)姜黃素藥物組： ①低濃度姜黃素組在24小時(shí)、48小時(shí)

7、OD值結(jié)果與空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(p＞0.05)，72小時(shí)OD值結(jié)果低于空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組(p＜0.05)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MTT抑制率分別為-2.9％、22.8％、15.0％；48小時(shí)和72小時(shí)的MTT抑制率明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)(p＜0.01)。 ②中濃度組在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的OD570值結(jié)果均比空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組明顯降低(p＜0.05)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MTT抑制率分別為16.3％、5

8、2.3％、60.0％；與陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)相比，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MTT抑制率無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。 ③高濃度組在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的OD值結(jié)果均比空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組明顯降低(p＜0.05)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MTT抑制率分別為28.9％、67.8％、87.2％；與陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)相比，24小時(shí)、48小時(shí)MTT抑制率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，72小時(shí)MTT抑制率明顯高于同一時(shí)間點(diǎn)的陽(yáng)性對(duì)照組(雷帕霉素)

9、(p＜0.05)。 4.免疫印記(Western-Blot)方法檢測(cè)p-ERK1/2、p-Akt、Caspase-9的水平變化： 姜黃素能明顯抑制p-ERK1/2、p-Akt水平的升高，姜黃素能升高細(xì)胞內(nèi)Caspase-9的水平，且隨著藥物濃度的增加上述效果也更加明顯。 結(jié)論：1.姜黃素能抑制rVSMCs的增殖，且這種抑制作用呈現(xiàn)很強(qiáng)的劑量、時(shí)間依賴性，高濃度姜黃素促進(jìn)rVSMCs凋亡。 2.姜黃素抑制r