七葉亭抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖及其信號(hào)通路研究.pdf

1、[目的]研究七葉亭(esculetin)對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞(rVSMCs)增殖的影響，為篩選一種安全、有效、價(jià)廉的藥物治療和預(yù)防血管增殖性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]體外培養(yǎng)rVSMCs，用不同濃度的七葉亭干預(yù)rVSMCs的生長(zhǎng)，觀察使用不同劑量的七葉亭后不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)rVSMCs增殖的影響，利用光學(xué)顯微鏡觀察rVSMCs形態(tài)學(xué)變化，采用細(xì)胞計(jì)數(shù)及四唑鹽試驗(yàn)(MTT)檢測(cè)rVSMCs生長(zhǎng)及增殖的影響，利用免疫印記(Western

2、-Blot)方法檢測(cè)七葉亭對(duì)細(xì)胞Ras信號(hào)通路中PI3K-Akt，ERK1/2，Caspase-9的影響。 [結(jié)果]1)光學(xué)顯微鏡觀察不同劑量對(duì)rVSMCs生長(zhǎng)的影響：低、中藥物劑量組抑制rVSMCs生長(zhǎng)，高劑量組顯示出很強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用及促細(xì)胞凋亡的作用。2)細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)不同劑量組對(duì)rVSMCs增殖的影響：空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比，無(wú)明顯差異(p＞0.05)；與溶劑對(duì)照相比，陽(yáng)性藥物(雷帕霉素)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的

3、增殖抑制率分別為31.8％、91.8％、79.6％，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均與對(duì)照組相比具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；低劑量七葉亭組24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的增殖抑制率分別為19.9％、52.5％、54.0％；中劑量七葉亭組24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的增殖抑制率分別為48.7％、64.6％、89.7％；高劑量七葉亭組24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的增殖抑制率分別為76.9％、87.8％、95.5％；三個(gè)時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

4、p＜0.05)；24h、72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)中、高劑量組抑制作用強(qiáng)于雷帕霉素組(p＜0.05)。 3)四唑鹽試驗(yàn)(MTT)檢測(cè)對(duì)rVSMCs活性的影響：MTT法檢測(cè)表明，空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比，無(wú)明顯差異(p＞0.05)；與溶劑對(duì)照相比，陽(yáng)性藥物(雷帕霉素)在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)抑制率分別為33.5％、89.9％、75.9％，低劑量組在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)抑制率分別為15.6％、47.9％、49.3％，中劑量組在

5、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)抑制率分別為43.0％、62.3％、93.1％，高劑量組在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)抑制率分別為69.7％、82.3％、97.5％，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；24h、72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)中、高劑量組抑制作用強(qiáng)于雷帕霉素組(p＜0.05)。 4)免疫印記(Western-Blot)方法檢測(cè)Akt，ERK1/2，Caspase-9：七葉亭能明顯抑制Akt、ERK1/2磷酸化，促

6、進(jìn)Caspase-9的活化，且隨著藥物劑量的增加抑制Akt、ERK1/2磷酸化水平，促進(jìn)Caspase-9的活化效果也更加明顯。 [創(chuàng)新點(diǎn)] 1)本實(shí)驗(yàn)首次以雷帕霉素為陽(yáng)性對(duì)照，證實(shí)七葉亭中、高劑量組抑制rVSMCs的增殖作用強(qiáng)于雷帕霉素； 2)七葉亭調(diào)控VSMC增殖的分子靶點(diǎn)為ERK1/2和Akt，為今后研究七葉亭相關(guān)的應(yīng)用技術(shù)提供必需的理論依據(jù)； 3)本實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)七葉亭能促進(jìn)caspase9的活化，