Caveolae對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及可能機制.pdf

1、研究背景和目的:
　　遲發(fā)性腦血管痙攣(delayedcerebralvasospasm，DCVS)是蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage，SAH)后的嚴(yán)重并發(fā)癥，也是SAH后致死和致殘的主要原因。其主要表現(xiàn)是受累動脈管腔狹窄、管壁增厚等形態(tài)學(xué)改變，包括血管壁中內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)增殖，但DCVS的發(fā)病機制尚未完全闡明[1]。

2、　　小窩(caveolae)是細(xì)胞質(zhì)膜表面特異性的內(nèi)陷微區(qū)，該結(jié)構(gòu)聚集了多種受體分子，如轉(zhuǎn)化生長因子受體、表皮生長因子受體、血小板源性生長因子受體、血管緊張素受體等，在信號通路中起重要的樞紐作用[2]。小窩蛋白-1(caveolin-1)是caveolae的表面標(biāo)記蛋白，而且使caveolae保持結(jié)構(gòu)和功能完整。有研究顯示，caveolin-1在調(diào)節(jié)VSMCs的收縮和增殖反應(yīng)中起重要的作用[3-4]。新近研究提示，DCVS的發(fā)生可能與轉(zhuǎn)

3、化生長因子β1(transforminggrowthfactor-betal，TGF-β1)、血管內(nèi)皮生長因子等有關(guān)，這些細(xì)胞因子積極參與了腦血管壁增殖過程[5]。而且TGF-β可以啟動胞內(nèi)Smads信號系統(tǒng)的表達調(diào)控[6]。因此，我們設(shè)想通過體外培養(yǎng)VSMCs，破壞細(xì)胞膜Caveolae結(jié)構(gòu)后，觀察TGF-β/Smad途徑信號通路是否增強，從而抑制VSMCs的增殖。以此研究蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管壁增殖的可能機制。
　　方法:

4、r>　　1、解剖SD大鼠，分離并取出頸總動脈進行體外組織貼塊法培養(yǎng)原代血管平滑肌細(xì)胞，免疫熒光法鑒定血管平滑肌細(xì)胞;
　　2、CCK-8法檢測實驗組和正常對照組血管平滑肌增殖變化;
　　3、免疫組化法檢測caveolin-1、TβR-1在細(xì)胞中表達水平;
　　4、Westernblot法檢測caveolin-1、pSmad2蛋白表達;
　　5、RT-PCR檢測caveolin-1、Smad2mRNA轉(zhuǎn)錄水平。

5、r>　　結(jié)果:
　　1、成功分離和體外培養(yǎng)頸總動脈血管平滑肌細(xì)胞;
　　2、CCK-8法檢測顯示MβCD干擾后，實驗組VSMCs增殖被顯著抑制(P＜0.01);
　　3、免疫組化法檢測實驗組caveolin-1在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中表達降低，TβR-1表達增強;
　　4、RT-PCR法和westernblot法分別檢測實驗組caveolin-1基因表達水平和蛋白表達水平明顯下降;
　　5、RT-PCR法檢測實驗