小檗堿對血管平滑肌細胞增殖、遷移和凋亡的影響.pdf

1、目的：經皮穿刺腔內冠狀動脈成形術以及支架術是治療冠心病的重要而有效的方法，已經成功應用多年，但支架植入術術后再狹窄(restenosis,RS)限制了它的發(fā)展。血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)增殖和遷移是動脈粥樣硬化和經皮腔內冠狀動脈成形術及支架術術后再狹窄的發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎。藥物洗脫支架(drug elutingstent,DES)的應用已使血管損傷后再狹窄率顯著降低，隨著治療藥

2、物緩慢釋放入血管壁，血管損傷后血管平滑肌細胞的增殖和遷移受到抑制，從而減少了血管重塑和支架植入后再狹窄。近年臨床試驗已經證實藥物洗脫支架植入后再狹窄率為5-10％，而傳統(tǒng)裸支架植入后再狹窄率為20-25％<'[1，2]。本研究觀察小檗堿對體外血管平滑肌細胞增殖、遷移和凋亡的影響。 方法：用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)兔主動脈平滑肌細胞，傳到8～10代，根據小檗堿作用時間不同分成24小時組和72小時組，每一時間組根據加入小

3、檗堿的濃度不同分為5組：0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L組。不同濃度小檗堿作用24小時、72小時后分別用臺盼藍(trypan blue)溶液染色進行活細胞計數，并用四甲基偶氮唑藍法(methylthiazoletrazolium,MTT)于酶標儀檢測吸光度值，計算細胞生長抑制率，以觀察藥物對血管平滑肌細胞增殖的影響。不同濃度小檗堿作用后，用Boyden小室法檢測穿過硝酸纖維素濾膜

4、(cellulose nitrate membranes，CN)的細胞數，以觀察小檗堿對血管平滑肌細胞遷移的影響。用末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧三磷酸尿苷缺口末端標記方法(TUNEL)計算各濃度小檗堿作用后細胞凋亡陽性率，并用流式細胞儀檢測細胞凋亡率，以觀測小檗堿對血管平滑肌細胞凋亡的影響。 結果：臺盼藍活細胞計數顯示小檗堿作用24小時后，對照組、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L濃度小

5、檗堿干預組活細胞數分別為3.51±0.54×10<'8>/L、2.65±0.03×10<'8>/L、2.17±0.04×10<'8>/L、1.76±0.01×10<'8>/L和1.68±0.05×10<'8>/L，各實驗組與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，隨小檗堿濃度增加，活細胞數減少。小檗堿作用72小時對照組、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L濃度小檗堿干預組活細胞數分別為5.39±0.

6、94×10<'8>/L、3.64±0.03×10<'8>/L、2.40±0.06×10<'8>/L、2.16±0.04×10<'8>/L和2.01±0.07×10<'8>/L，各實驗組與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，隨小檗堿濃度增加，活細胞數減少。MTT法檢測顯示小檗堿作用24小時后，對照組、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L濃度小檗堿干預組A值分別為0.139±0.024、0.061±

7、0.014、0.058±0.005、0.057±0.005和0.056±0.005，小檗堿作用72小時后，對照組、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L濃度小檗堿干預組A值分別為0.196±0.118、0.060±0.013、0.057±0.007、0.054±0.002和0.054±0.005，24小時、72小時各實驗組與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，隨小檗堿濃度增加，MTFA值增加。

8、 Boyden小室法檢測顯示小檗堿作用48小時后，對照組、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L濃度小檗堿干預組的穿膜細胞數分別為.50.61±12.11個/高倍視野、31.23±2.61個/高倍視野、24.50±1.67個/高倍視野、20.39±2.25個/高倍視野和19.52±1.64個/高倍視野。各濃度小檗堿組對兔主動脈平滑肌細胞的遷移均有抑制作用(P<0.05)，隨小檗堿濃度增加，穿膜細胞

9、數減少。TUNEL檢測顯示各組施加干預后48小時對照組、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L濃度小檗堿干預組的凋亡陽性率分別為13.15±1.83％、12.04±1.36％、10.62±1.21％、9.73±1.68％和9.72±1.16％，各濃度小檗堿組與對照組相比無顯著差異性(P>0.05)。流式細胞儀檢測小檗堿作用血管平滑肌細胞48小時后，對照組、50μmol/L和100μmol/L濃度小檗堿

10、干預組細胞凋亡率分別為20.4％、18.7％和17.2％。 結論：與對照組相比，各濃度小檗堿組均使血管平滑肌細胞活細胞數減少，MTTA值增加，生長抑制率增高，隨著小檗堿干預時間的延長，活細胞數減少，MTTA值增加，細胞生長抑制率增加。與對照組相比，各濃度小檗堿組均使血管平滑肌細胞穿膜細胞數減少，隨小檗堿濃度增加，穿膜細胞數減少。與對照組相比，各濃度小檗堿組未使細胞凋亡率增加。小檗堿對血管平滑肌細胞的增殖和遷移有顯著抑制作用，而小