紫草素對PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移影響的實驗研究.pdf

1、目的: 觀察紫草素(shikonin)對血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞(RASMCs)增殖、遷移的影響，探討其可能機(jī)制。 方法: 大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)(植塊培養(yǎng)法)，建立RASMCs體外培養(yǎng)模型，取3～8代細(xì)胞進(jìn)行實驗。①分為無血清的DMEM，PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)七組，采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)

2、比色法(MTT法)檢測PDGF-BB誘導(dǎo)下紫草素對細(xì)胞增殖的影響；②分為無血清的DMEM，PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0、0.25、0.5、1.0μmol/L)五組，采用臺盼藍(lán)拒染計數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線；采用劃痕試驗法(Pipettetip wounding injury)進(jìn)行細(xì)胞遷移實驗；③分為PDGF-BB 0、1、5、10、20、40 ng/mL六組，采用Western Blot法檢測RASMCs中HSP-27活性的

3、變化；④分為PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0.25、0.5、1.0μmol/L)組，采用Western Blot法檢測各組VSMCs內(nèi)ERK1/2，P-ERK1/2，P38，P-P38，HSP27，Phospho-HSP27蛋白表達(dá)。 結(jié)果: ①與對照組(未加藥組)相比，0.25～1μmol/L紫草素細(xì)胞毒性作用不顯著(均P>0.05)；紫草素的濃度增加到2～4μmol/L時，使VSMCs的活性較對照組降低(P<0.

4、05)；②紫草素可呈時間和劑量依賴性地抑制細(xì)胞生長，以1μmol/L作用72 h最為顯著(2.37×105/孔 vs 5.53×105/孔，P<0.01)；③劃痕試驗結(jié)果表明，細(xì)胞經(jīng)PDGF-BB作用后，遷移活性明顯增加，PDGF-BB作用于細(xì)胞12h，VSMCs遷移活性是對照組的2.73倍，24h是對照組的3.07倍，均有顯著性差異((P<0.01)，紫草素呈時間、劑量依賴性抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠VSMCs的遷移；④PDGF-B

5、B呈濃度依賴性誘導(dǎo)VSMCs的HSP27磷酸化，作用峰值濃度為40ng/ml，較對照組增高159.1％(P<0.01)；PDGF-BB(20ng/ml)誘導(dǎo)后VSMCs的HSP27磷酸化水平在30分鐘達(dá)高峰；⑤紫草素(0.25～1.0umol/L)呈濃度依賴性抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的HSP27磷酸化，在1.0umol/L抑制作用最明顯，最大抑制率為56.8％(P<0.01)；⑥體外培養(yǎng)的RASMCs，在PDGF-BB(20ng/mL)+

6、紫草素(0.25μmol/L)組的培養(yǎng)液中孵育24h后，P-P38蛋白表達(dá)明顯下降(P<0.05)；在PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0.5μmol/L)組及PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(1.0μmol/L)組，P-ERK1/2、P-P38蛋白表達(dá)均較PDGF-BB組明顯下降((P<0.01)，表明紫草素通過顯著抑制ERK/P38MAPK信號通路，下調(diào)ERK1/2、P38的磷酸化水平，抑制PDGF-BB誘導(dǎo)RASM