SIRT1抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞葡萄糖攝取和代謝.pdf

1、目的:血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)中葡萄糖攝取和代謝的異常增加能導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等多種血管疾病，已有研究表明PDGF-BB通過(guò)誘導(dǎo)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)的膜轉(zhuǎn)位，促進(jìn)葡萄糖的攝取和代謝。去乙?；窼IRT1能影響胰腺β細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞等葡萄糖的攝取和代謝，而在VSMCs中SIRT1與葡萄糖攝取和代謝的關(guān)系尚不清楚，本實(shí)驗(yàn)利用SIRT1的激動(dòng)劑和抑制劑分別處理VSMCs，以探討SIRT1與葡萄糖攝取及代謝的相關(guān)性。
　

2、　方法與結(jié)果:
　　1、PDGF-BB刺激VSMCs的GLUT4膜轉(zhuǎn)位
　　PDGF-BB(20 ng/mL)刺激VSMCs0、5、15、30 min后，用Westernblotting及細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)GLUT4的亞細(xì)胞分布。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，在PDGF-BB刺激的VSMCs中，GLUT4膜轉(zhuǎn)位顯著增強(qiáng)，并在15 min達(dá)到高峰。
　　2、SIRT1抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs的GLUT4膜轉(zhuǎn)位

3、>　　培養(yǎng)的VSMCs經(jīng)SIRT1的激動(dòng)劑白藜蘆醇(50μM)和SIRT1抑制劑EX-527（10μM）預(yù)孵育4h后，PDGF-BB(20 ng/mL)刺激15 min。細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，白藜蘆醇預(yù)孵育組GLUT4膜轉(zhuǎn)位減弱，而EX-527預(yù)孵育組GLUT4膜轉(zhuǎn)位增強(qiáng)。
　　3、PDGF-BB刺激VSMCs葡萄糖攝取
　　PDGF-BB(20 ng/mL)和熒光標(biāo)記葡萄糖類(lèi)似物2-N[7-硝基苯-2-乙二酸

4、，34羥氨基]-2-脫氧葡萄糖(2-NBDG,100μM)共同刺激VSMCs0、5、10、20、30、60 min，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)VSMCs對(duì)2-NBDG的攝取。結(jié)果顯示，PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs葡萄糖攝取量呈時(shí)間依賴(lài)性增強(qiáng)，并在20 min時(shí)達(dá)到高峰。
　　4、SIRT1抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs葡萄糖攝取
　　培養(yǎng)的VSMCs經(jīng)SIRT1的激動(dòng)劑白藜蘆醇和SIRT1（50μM）抑制劑 EX-527（10μM

5、）預(yù)孵育4h后，PDGF-BB(20 ng/mL)刺激20 min，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)VSMCs對(duì)2-NBDG攝取。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，白藜蘆醇預(yù)孵育組葡萄糖攝取減弱，而EX-527預(yù)孵育組葡萄糖攝取增強(qiáng)。
　　5、PDGF-BB增強(qiáng)VSMCs己糖激酶活性
　　PDGF-BB(20 ng/mL)刺激VSMCs0、5、10、15、30、45、60 min后，檢測(cè)VSMCs己糖激酶活性。結(jié)果顯示，VSMCs己糖激酶活性與PDG

6、F-BB刺激呈時(shí)間依賴(lài)性增強(qiáng)，30 min達(dá)到高峰。
　　6、SIRT1抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs己糖激酶活性增強(qiáng)
　　培養(yǎng)的VSMCs經(jīng)SIRT1的激動(dòng)劑白藜蘆醇(50μM)和SIRT1抑制劑EX-527(10μM)預(yù)孵育4h后，PDGF-BB(20 ng/mL)刺激30 min后檢測(cè)VSMCs己糖激酶活性，結(jié)果顯示，白藜蘆醇預(yù)孵育組己糖激酶活性減弱，而EX-527預(yù)孵育組己糖激酶活性增強(qiáng)。
　　結(jié)論: