SPHSG抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖的實驗研究.pdf

1、目的：探討增殖抑制基因（hyperplasia suppressor gene，HSG）的有效功能片段合成的多肽SPHSG抑制大鼠血管平滑肌細胞（Vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖的作用及其相關分子機制。
　　方法：人工合成多肽MRSP，其為HSG的p21ras特性結構域的N端加TAT穿膜序列后合成的多肽。已研究證實MRSP具有誘導VSMC凋亡和抑制其增殖的作用。SPHSG是在MRSP基礎上去掉

2、了3個氨基酸后合成的多肽，NC是無效對照肽，其與SPHSG具有相同的氨基酸個數。本研究以Control組為空白對照，NC組為無效對照，鈣調蛋白結合序列（CBS）和雷帕霉素（Rapamycin）為陽性對照，分別采用細胞計數法、水溶性四氮唑鹽法（CCK-8）及流式細胞儀檢測細胞周期法比較SPHSG和MRSP抑制血管平滑肌細胞增殖的效果，并采用蛋白免疫印跡法（Western Blot）探討SPHSG抑制VSMC增殖作用的分子機制。
　　

3、結果：細胞計數和CCK-8結果均顯示,與Control組和NC組相比，SPHSG組和MRSP組具有顯著抑制VSMC增殖的作用，且抑制作用呈時間依賴性（P﹤0.05），SPHSG組比MRSP組抑制效果更顯著（P﹤0.05），與CBS組和雷帕霉素組抑制效果相當（P﹥0.05）。流式細胞儀檢測細胞周期結果顯示，與Control組和NC組相比，SPHSG組和MRSP組均能使VSMC生長停滯于細胞周期的G0/G1期，進入S期的細胞明顯減少（P﹤0

4、.05），與CBS組和雷帕霉素組效果相當（P﹥0.05）。Western Blot結果表明，與Control組和NC組相比，SPHSG組顯著降低VSMC中磷酸化ERK1/2蛋白的表達水平，效果比MRSP組更明顯（P﹤0.05）。
　　結論：HSG基因有效功能片段合成肽SPHSG具有顯著抑制大鼠VSMC增殖的作用，且抑制增殖作用效果較MRSP更強，其分子機制與抑制Ras-Raf-ERK信號傳導通路中ERK1/2蛋白的磷酸化表達水平有