白藜三醇抗大鼠血管平滑肌細胞增殖機制研究.pdf

1、目的：觀察植物雌激素白藜三醇(RV)對大鼠血管平滑肌細胞增殖的調控機制，探討ER信號途徑在RV抗動脈粥樣硬化中的重要作用，為今后RV作為血管增殖性疾病新的靶向治療提供理論和實驗依據。
　　 方法：(1)用改良的植塊貼壁法體外培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs)，在倒置顯微鏡下進行細胞形態(tài)學觀察并對培養(yǎng)的細胞進行SM-α actin免疫組化鑒定。(2)尋找RV對JNK發(fā)揮作用的時間點：培養(yǎng)大鼠VSMCs并用50μmol/l的RV分

2、別干預0、12、24、36、48、60h，用Western blot檢測各時間點VSMCs中JNK,P-JNK的表達水平。(3)藥物干預部分：實驗分為6組(每組n=6)。正常對照組（NC組），含10％胎牛血清(FBS)的DMEM; RV干預組（RV組），50μmol/L RV干預24h；血管緊張素Ⅱ組（AngⅡ組），1μ,mol/L AngⅡ干預12h; RV+AngⅡ組，1μmol/L AngⅡ干預12h，然后加入50μmol/L R

3、V干預24h; RV+ICI182780組，1μmol/L ICI182780干預2h，然后加入50μmol/L RV干預24h; RV+ICI182780+AngⅡ組，1μmol/L ICI182780干預2h，然后加入1μmol/L AngⅡ干預12h，最后加入50μmol/L RV干預24h。(4)用MTT法檢測各組細胞增殖活性(5)使用Western blot檢測各組雌激素受體α(ERα)、雌激素受體β(ERβ)、JNK、P-J

4、NK、P38、P-P38、C-myc蛋白的表達水平。(6)用RT-PCR檢測如上各干預組VSMCs中ERβmRNA的表達。
　　 結果：(1)原代培養(yǎng)的VSMCs生長良好，光鏡下呈長梭形及“峰與谷”樣生長。SMα-actin免疫組化的結果顯示培養(yǎng)的細胞具有典型的VSMC特征。(2)RV干預不同時間各組JNK及P-JNK蛋白的表達情況：不同時間點各組JNK蛋白的表達無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。RV干預12h，24h,36h組

5、P-JNK蛋白較干預0h組的表達明顯增加（P＜0.05），RV干預48h,60h組較干預0h組的表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(3)用MTT法檢測各組細胞增殖活性顯示各組細胞增殖活性有明顯差異，RV干預組細胞增殖活性最弱，AngⅡ組細胞增殖活性最強，說明白藜三醇可明顯抑制血管平滑肌細胞的增殖，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(4)不同藥物干預組ERα, ERβ, JNK, P-JNK， P38, P-P38， C-myc蛋白的

6、表達：各組JNK， P38蛋白表達差異無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。ERα, ERβ, P-JNK蛋白的表達在RV組較其余各組明顯增加，在RV+ICI182780+AngⅡ組較其余各組明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); P-P38, C-myc蛋白的表達在AngⅡ組較其余各組明顯增加，在RV組較其余各線明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(5)各組ERβmRNA的表達：ERβmRNA的表達在RV組較其余各組明顯增加，在RV

7、+IC1182780+AngⅡ組較其余各組明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：白藜三醇可促進ERα, ERβ蛋白及ERβmRNA的表達，且在適宜的濃度和作用時間下，可激活培養(yǎng)的血管平滑肌細胞JNK信號通路，促進JNK蛋白的磷酸化，白藜三醇的這種作用，可被雌激素受體拮抗劑ICI182780抑制；白藜三醇司以抑制C-myc, P-P38的表達，該作用也可被ICI182780抑制，說明白藜三醇可能是通過與血管平滑肌細