三氧化二砷誘導血管平滑肌細胞凋亡機制的研究.pdf

1、目的: 通過觀察三氧化二砷(arsenic trioxide，As2O3)對血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)的促凋亡作用，初步探討As2O3誘導VSMCs凋亡的機制，為其以后作為藥物涂層支架的涂層藥物提供理論依據(jù)。 方法: 無菌條件下取SD大鼠胸主動脈血管中膜，運用改良的植塊貼壁法體外培養(yǎng)VSMCs，在倒置顯微鏡下進行細胞形態(tài)學觀察并對培養(yǎng)的細胞進行SMα-actin免疫組化

2、鑒定。繼續(xù)培養(yǎng)并傳代細胞，取第5～6代細胞，加入含濃度分別為0、1.0、4.0、8.0μmol/L As2O3的培養(yǎng)基(DMEM)共同孵育24h，分別采用四氮唑藍(MTT)還原反應(yīng)檢測As2O3對VSMCs活力的影響，采用流式細胞儀(flow cytometry,FCM)檢測細胞膜磷脂酰絲氨酸(PS)外翻的細胞百分率、DAPI染色熒光顯微鏡觀察.As2O3作用后凋亡細胞細胞核的形態(tài)等方法鑒定細胞凋亡，采用酶標儀檢測Caspase-3活性

3、，Rhodamine 123(Rh123)/碘化丙啶(PI)雙染色分析線粒體跨膜電位(mitochondrial membrane potential，△ψm)變化。 結(jié)果: ①培養(yǎng)的VSMCs生長良好，光鏡下呈長梭形及“峰與谷”樣生長。SMα-actin免疫組化的結(jié)果顯示所得的細胞為典型的VSMCs；②As2O3對VSMCs具有促凋亡作用，該作用呈劑量及時間的依賴性，As2O3(1.0～8.0μmol/L)組在24h與同期對照

4、組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；③酶標儀檢測表明：As2O3(1.0～8.0μmol/L)組在24h與同期對照組相比，VSMCs裂解液中Caspse-3酶活性明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；④Rh123/PI雙染色檢測表明：As2O3(1.0～8.0μmol/L)組在24h與同期對照組相比，VSMCs的△ψm明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論: ①改良植塊貼壁法能使VSMCs原代培養(yǎng)的時間明顯