Peroxynitrite誘導(dǎo)人腦血管平滑肌細(xì)胞DDR2表達(dá)機(jī)制的研究.pdf

1、過(guò)氧亞硝酸鹽（peroxynitrite，ONOO-）作為一種強(qiáng)氧化劑，具有高度的反應(yīng)活性和不穩(wěn)定性。我們前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在離體的鼠的頸動(dòng)脈環(huán)中，10-8～10-4mol/L濃度的ONOO-對(duì)其血管平滑肌細(xì)胞具有強(qiáng)大的血管舒張作用。同時(shí)，研究也表明外源性的ONOO誘導(dǎo)人腦血管平滑肌細(xì)胞(human brain vascular smooth muscle cells，HBVSMCs)的凋亡涉及盤狀結(jié)構(gòu)域受體2(discoidin do

2、main receptor 2，DDR2)的激活，ONOO-誘導(dǎo)HBVSMCs中DDR2的表達(dá)具有濃度依賴性，呈現(xiàn)雙向表達(dá)。但是，ONOO-誘導(dǎo)HBVSMCs DDR2表達(dá)的機(jī)制并不明確。
　　 本實(shí)驗(yàn)中，我們著重探索ONOO作用于HBVSMCs誘導(dǎo)DDR2表達(dá)可能存在的機(jī)制。體外細(xì)胞培養(yǎng)HBVSMCs和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)1/2抑制劑PD9

3、8059預(yù)處理的HBVSMCs，分別采用吖啶橙染色檢測(cè)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，噻唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞生存率，Western blot及Real-time PCR檢測(cè)DDR2及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9(matrix metalloproteinases，MMPs)的表達(dá)。
　　 結(jié)果顯示:
　　 (1) PD98059預(yù)處理的HBVSMCs仍然貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞無(wú)明顯變化，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PD98059預(yù)處理前后細(xì)胞的生存

4、率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 (2)0～10μmol/L ON(O)O-誘導(dǎo)的HBVSMCs DDR2蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，隨著ONOO-濃度的增加， DDR2蛋白表達(dá)則逐漸下調(diào)。
　　 (3)10μmol/L ONOO-作用于PD98059預(yù)處理的HBVSMCs后，與未經(jīng)預(yù)處理組相比，DDR2蛋白/mRNA及MMP-9蛋白水平明顯下調(diào)。
　　 結(jié)論:PD98059抑制了ONOO-誘導(dǎo)的DDR2/MMP-9表達(dá)，ONO