PDCD4及DDR2在Peroxynitrite誘導(dǎo)人中樞血管平滑肌細(xì)胞凋亡過程中表達(dá)的變化.pdf

1、一氧化氮(nitric oxide，NO)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不僅維系血管自穩(wěn)，而且影響血管性疾病的發(fā)生與發(fā)展。在病理?xiàng)l件下，NO過量產(chǎn)生導(dǎo)致的細(xì)胞毒作用，主要?dú)w咎于自由基ONOO-的形成。ONOO-是NO和超氧陰離子相互作用的產(chǎn)物，是一種具有普遍性的強(qiáng)氧化劑。以往對ONOO-作用于心血管系統(tǒng)的研究大多偏重于其對血管平滑肌收縮或舒張狀態(tài)的影響。有關(guān)ONOO-對HCVSMCs生物學(xué)特性的影響，尤其是凋亡的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)以兩種新型分子-凋亡基

2、因PDCD4和盤狀結(jié)構(gòu)域受體（discoidin domain receptor2，DDR2）的表達(dá)為切入點(diǎn)，探討ONOO-作用于HCVSMCs分子調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　 PDCD4是近年來備受關(guān)注的一種程序性細(xì)胞死亡因子，也是一種抑癌基因。它位于染色體10q24上，其編碼蛋白具有多個磷酸化位點(diǎn)，可與蛋白激酶C、脯氨酸激酶、酪氨酸激酶等相結(jié)合。它的退變對于體內(nèi)高效的蛋白翻譯過程來說是必需的。DDRs是最近發(fā)現(xiàn)的一類帶有盤狀結(jié)構(gòu)域的跨膜

3、受體型酪氨酸激酶，作為膠原受體和膠原傳感器，對膠原質(zhì)和量的變化進(jìn)行監(jiān)測，并把信息傳遞給成纖維細(xì)胞，調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的增殖、凋亡、分化、遷移、黏附和膠原蛋白的分泌、降解。哺乳動物體內(nèi)DDRs以兩種亞型存在，其中DDR2主要表達(dá)于心、骨骼肌、肺、腦和腎的間質(zhì)細(xì)胞，與相關(guān)細(xì)胞分泌MMP2相關(guān)。血管平滑肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能異常是血管性疾病發(fā)生和發(fā)展的病理基礎(chǔ)之一。血管平滑肌細(xì)胞的異常增殖、積聚、遷移及凋亡在心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起到關(guān)鍵性作

4、用。
　　 在本實(shí)驗(yàn)中，首先以終濃度分別為10、50、100μmol/L的ONOO-作用于體外培養(yǎng)的HCVSMCs，采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法測定細(xì)胞生存率，采用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡率，分別以吖啶橙染色、Ho33342/PI熒光雙染進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。采用RT-PCR檢測PDCD4、DDR2mRNA的表達(dá)。采用Western-blot檢測PDCD4、DDR2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果顯示：(1)以O(shè)NOO-作用于HCVSMC

5、s24h，顯著抑制該系細(xì)胞增殖。(2)以O(shè)NOO-作用于HCVSMCs24h，明顯誘導(dǎo)該系細(xì)胞凋亡。(3)以O(shè)NOO作用于HCVSMCs24h，可引起DDR2mRNA及蛋白水平總體上呈現(xiàn)下降趨勢。(4)以O(shè)NOO-作用于HCVSMCs24h，引起PDCD4mRNA及蛋白水平顯著增加。
　　 結(jié)論ONOO-是通過誘導(dǎo)凋亡途徑抑制HCVSMCs的增殖。PDCD4及DDR2基因在ONOO-誘導(dǎo)HCVSMCs凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起到關(guān)鍵