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文檔簡介
1、目的:探討Daxx對Chol:MβCD誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響以及可能的機(jī)制。
方法:體外培養(yǎng)大鼠源性血管平滑肌細(xì)胞,然后分別將人源性 pcDNA3.1(+), pcDNA3.1(+)-Daxx質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞中,并通過 RT-PCR和Western Blot兩種方法檢測平滑肌細(xì)胞內(nèi) Daxx的表達(dá);然后再用10mg/L Chol:MβCD孵育48小時(shí),建立泡沫細(xì)胞模型,油紅O染色檢測細(xì)胞內(nèi)脂滴情況。再分別
2、采用 CCK-8法檢測血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測血管平滑肌細(xì)胞的凋亡情況。Western Blot檢測ASK1,P-JNK的表達(dá)情況。為了進(jìn)一步明確JNK通路在Chol:MβCD誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞凋亡中發(fā)揮的作用,我們采用JNK特異性抑制劑SP600125對其Chol:MβCD誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)。
結(jié)果:轉(zhuǎn)染后細(xì)胞經(jīng)RT-PCR和Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)Daxx表達(dá)明顯增加;用Chol:MβCD孵育
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