過表達(dá)Daxx對Chol-MβCD誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察Daxx對Chol:MβCD誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞荷脂與凋亡的影響，為延緩動脈粥樣硬化的病理改變提供理論依據(jù)。
　　方法：人源性Daxx基因重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR和Western blot檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)Daxx的表達(dá)。然后用Chol:MβCD與RAW264.7細(xì)胞共同孵育48h，建立RAW264.7細(xì)胞荷脂模型，油紅O染色和酶熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)荷脂蓄積情況。MTT檢測細(xì)胞活性，流式細(xì)胞

2、術(shù)觀察細(xì)胞凋亡。Western blot測定ASK1，JNK，Caspase3的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)G418篩選14天后，RT-PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)Daxx明顯高表達(dá)，表明穩(wěn)定轉(zhuǎn)染成功。Chol:MβCD與RAW264.7細(xì)胞共同孵育48h后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Daxx高表達(dá)組細(xì)胞膽固醇蓄積明顯，并且細(xì)胞活性下調(diào)，凋亡細(xì)胞數(shù)目增加；同時Daxx轉(zhuǎn)染細(xì)胞組ASK1，JNK，Caspase3蛋白表達(dá)明顯增高