慢病毒介導(dǎo)LXRs過表達對高糖誘導(dǎo)H9C2細胞凋亡的影響及機制.pdf

1、目的:
　　觀察高糖對H9C2細胞Bax、Bcl-2、NF-κB、caspase3的表達及細胞凋亡的影響;探討過表達LXRs對高糖誘導(dǎo)的H9C2細胞凋亡的干預(yù)作用及機制。
　　方法:
　　體外分別以低糖(5.5mmol/L葡萄糖,作為正常對照)、甘露醇(5.5mmol/L葡萄糖+27.5mmol/L甘露醇)及高糖(33 mmol/L葡萄糖)培養(yǎng)H9C2細胞(大鼠胚胎心肌細胞);獲得攜帶 Nr1h2、Nr1h3基因及空載

2、體的重組慢病毒感染高糖培養(yǎng)的H9C2細胞;采用CCK8檢測各組H9C2細胞增殖抑制率;應(yīng)用qRT-PCR分別檢測Bax mRNA、Bcl-2 mRNA水平;Western blot分別檢測NF-κB磷酸化蛋白、Bax、Bcl-2、cleavedcaspase3蛋白表達;Hoechst33342染色檢測細胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1.來源于大鼠胚胎心臟組織的H9C2細胞株在10％FBS低糖培養(yǎng)基正常貼壁及生長。
　　2

3、.CCK-8結(jié)果顯示:與對照組相比,甘露醇組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組抑制率最高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組抑制率降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.qRT-PCR檢測Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表達結(jié)果:與對照組相比,甘露醇組Bax mRNA差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組Bax

4、mRNA明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組Bax mRNA明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與對照組相比,甘露醇組Bcl-2 mRNA差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組Bcl-2 mRNA表達降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組Bcl-2 mRNA

5、上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.Western blot檢測NF-κB磷酸化蛋白、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、cleaved caspase3蛋白表達:與對照組相比,甘露醇組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組NF-κB磷酸化蛋白、Bax蛋白、cleaved caspase3蛋白表達均明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), LXRα和LX

6、Rβ組NF-κB磷酸化蛋白、Bax蛋白、cleaved caspase3蛋白表達降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與對照組相比,甘露醇組Bcl-2蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組Bcl-2蛋白表達降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組Bcl-2蛋白表達上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.Hoechst3334

7、2染色檢測細胞凋亡:與對照組相比,甘露醇組細胞凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組細胞凋亡率明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P<0.01);與高糖組相比, GFP組細胞凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組細胞凋亡率降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)高糖通過NF-κB的激活誘導(dǎo)H9C2細胞凋亡。
　　(2)LXRs過表達能夠改善高糖誘導(dǎo)的H9C2細胞