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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
觀察高糖對(duì)H9C2細(xì)胞Bax、Bcl-2、NF-κB、caspase3的表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響;探討過(guò)表達(dá)LXRs對(duì)高糖誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用及機(jī)制。
方法:
體外分別以低糖(5.5mmol/L葡萄糖,作為正常對(duì)照)、甘露醇(5.5mmol/L葡萄糖+27.5mmol/L甘露醇)及高糖(33 mmol/L葡萄糖)培養(yǎng)H9C2細(xì)胞(大鼠胚胎心肌細(xì)胞);獲得攜帶 Nr1h2、Nr1h3基因及空載
2、體的重組慢病毒感染高糖培養(yǎng)的H9C2細(xì)胞;采用CCK8檢測(cè)各組H9C2細(xì)胞增殖抑制率;應(yīng)用qRT-PCR分別檢測(cè)Bax mRNA、Bcl-2 mRNA水平;Western blot分別檢測(cè)NF-κB磷酸化蛋白、Bax、Bcl-2、cleavedcaspase3蛋白表達(dá);Hoechst33342染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
結(jié)果:
1.來(lái)源于大鼠胚胎心臟組織的H9C2細(xì)胞株在10%FBS低糖培養(yǎng)基正常貼壁及生長(zhǎng)。
2
3、.CCK-8結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,甘露醇組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組抑制率最高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組抑制率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.qRT-PCR檢測(cè)Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表達(dá)結(jié)果:與對(duì)照組相比,甘露醇組Bax mRNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組Bax
4、mRNA明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組Bax mRNA明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對(duì)照組相比,甘露醇組Bcl-2 mRNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組Bcl-2 mRNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組Bcl-2 mRNA
5、上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4.Western blot檢測(cè)NF-κB磷酸化蛋白、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、cleaved caspase3蛋白表達(dá):與對(duì)照組相比,甘露醇組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組NF-κB磷酸化蛋白、Bax蛋白、cleaved caspase3蛋白表達(dá)均明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), LXRα和LX
6、Rβ組NF-κB磷酸化蛋白、Bax蛋白、cleaved caspase3蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對(duì)照組相比,甘露醇組Bcl-2蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組Bcl-2蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與高糖組相比,GFP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
5.Hoechst3334
7、2染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡:與對(duì)照組相比,甘露醇組細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高糖組與GFP組細(xì)胞凋亡率明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.01);與高糖組相比, GFP組細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),LXRα和LXRβ組細(xì)胞凋亡率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
(1)高糖通過(guò)NF-κB的激活誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞凋亡。
(2)LXRs過(guò)表達(dá)能夠改善高糖誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞
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