白藜蘆醇對脂多糖誘導H9c2細胞損傷的保護作用及其機制.pdf

1、目的：研究脂多糖(lipopolysaccharide，LPS）誘導的H9c2細胞損傷的信號通路及白藜蘆醇（resveratrol，RSV）對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導的H9c2細胞損傷的影響及相關機制。
　　方法:1.將H9c2細胞隨機分為實驗組（Con），白藜蘆醇5μM組（R5），白藜蘆醇10μM組（R10），白藜蘆醇20μM組（R20），白藜蘆醇50μM組（R50）。其中Con組不做任何處理，

2、R5組、R10組、R20組、R50組分別用5μM、10μM、20μM、50μM的白藜蘆醇處理24h，MTT法檢測H9c2細胞增殖能力。2.將H9c2細胞分為對照組（Con），脂多糖組（LPS）,脂多糖+白藜蘆醇5μM組（L+R5），脂多糖+白藜蘆醇10μM組(L+R10)，脂多糖+白藜蘆醇20μM組(L+R20)，脂多糖+白藜蘆醇50μM組(L+R50)。其中Con組不做任何處理，L+R5組、L+R10組、L+R20組、L+R50組分別

3、用5μM、10μM、20μM、50μM的白藜蘆醇預先處理24h，然后將LPS組、L+R5組、L+R10組、L+R20組、L+R50組和10μg/ml的脂多糖共同培養(yǎng)12h。MTT法檢測H9c2細胞增殖能力。3.將六孔板培養(yǎng)的H9c2心肌細胞放置在37℃5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24h后，用LPS10μg/ml處理0 min,5min，10min，20min，30min，60min后，評估 LPS在不同時間點對 H9c2細胞表達 p-P38

4、，P38 p-JNK1/2,JNK1/2,p-ERK1/2，ERK1/2，IκBα，p-p65，p65，β-actin的影響。4.將H9c2細胞分為對照組（Con），脂多糖組（LPS），脂多糖+白藜蘆醇5μM組（L+R5），脂多糖+白藜蘆醇10μM組(L+R10)，脂多糖+白藜蘆醇20μM組(L+R20)，脂多糖+白藜蘆醇50μM組(L+R50)。其中Con組不做任何處理，L+R5組、L+R10組、L+R20組、L+R50組分別用5μM

5、、10μM、20μM、50μM的白藜蘆醇預先處理24h，然后將LPS組、 L+R5組、L+R10組、L+R20組、L+R50組和10μg/ml的脂多糖共同培養(yǎng)20min。Western blot檢測p-P38，P38，p-JNK1/2,JNK1/2,p-ERK1/2，ERK1/2，IκBα，p-p65，p65，β-actin的表達水平。5、將H9c2細胞隨機分為Con組、LPS組、RSV 組、L+R5組；其中RSV組、L+R5

6、組用5μM RSV預先處理24 h，再將 LPS組和 L+R5組用10μg/mL的LPS共同處理12 h。免疫熒光法檢測H9c2心肌細胞內活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平。流式細胞術檢測H9c2心肌細胞凋亡。ELISA法檢測細胞質中TNF-α的表達。
　　結果：
　　1）低濃度的白藜蘆醇對H9c2細胞的影響不大，但是較高濃度（50μM）的白藜蘆醇對H9c2細胞增殖有明顯抑制作用（P＜0.0

7、5）。
　　2）與對照組相比，LPS刺激12h能對H9c2細胞增殖產生明顯抑制作用，5μM的白藜蘆醇預先處理24h能顯著減弱LPS對H9c2細胞增殖的抑制作用（P＜0.05）。
　　3）將H9c2心肌細胞用脂多糖處理不同時間后，發(fā)現(xiàn)脂多糖刺激5min后，p-P38，p-JNK1/2，p-ERK1/2，p-p65開始升高，同時IκBα表達水平開始下調。在刺激20min時，P38，JNK1/2，ERK1/2，p65磷酸化上升水平

8、達到最高峰（P＜0.01）且IκBα下降水平同時達到最低（P＜0.01），處理30min后p-P38，p-JNK1/2，p-ERK1/2，p-p65表達水平開始下降，IκBα表達水平開始上升。
　　4）用不同濃度RSV處理H9c2心肌細胞24 h后，再用LPS處理20min，5μM RSV能夠顯著下調p-P38，p-JNK1/2，p-ERK1/2，p-p65表達（P＜0.01）；并上調IκBα表達（P＜0.01），但是50μM R

9、SV顯著上調p-P38，p-JNK1/2，p-ERK1/2，p-p65表達（P＜0.01），并下調IκBα表達（P＜0.01）。
　　5）與Con組相比，LPS組H9c2細胞內ROS的產生量明顯增加（P＜0.01）；而用5μM濃度的RSV預處理后能顯著降低 LPS誘導的細胞內ROS的產生量（P＜0.01）。
　　6）細胞流式術檢測不同組細胞凋亡的情況發(fā)現(xiàn)，脂多糖處理的H9c2心肌細胞凋亡數(shù)量明顯增加（P＜0.05），而用5μ

10、M濃度的RSV預處理后能顯著降低 LPS誘導的H9c2心肌細胞凋亡（P＜0.01）。
　　7）與Con組相比，LPS明顯誘導TNF-α上調（P＜0.05），而用5μM濃度的RSV 預處理后，TNF-α的表達顯著下降（P＜0.05）。
　　結論:1）脂多糖通過上調p-P38，p-JNK1/2，p-ERK1/2，p-p65的表達，下調IκBα的表達誘導H9c2細胞損傷。2）白藜蘆醇通過下調p-P38，p-JNK1/2，