白藜蘆醇對脂多糖誘導的肺泡巨噬細胞微小RNA-146a表達的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察白藜蘆醇對脂多糖(LPS)誘導肺泡巨噬細胞微小RNA-146a(miR-146a)表達的影響，探討白藜蘆醇對肺泡巨噬細胞炎癥反應的調控作用及其機制，為臨床治療膿毒癥肺損傷提供新的治療途徑。
　　 方法：
　　 將體外培養(yǎng)的大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)按2×106個/孔接種于六孔板，細胞貼壁90min，分為磷酸鹽緩沖液(PBS)對照組、終濃度1μg/ml LPS處理組、1μg/ml白藜蘆醇預處

2、理30min+終濃度1μg/ml LPS處理組、10μg/ml白藜蘆醇預處理30min+終濃度1μg/ml LPS處理組，細胞培養(yǎng)6h后，觀察各組細胞形態(tài)學改變，并收集細胞和細胞培養(yǎng)上清液，采用實時熒光定量PCR檢測細胞中TNF-αmRNA和miR-146a的表達變化，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白的表達變化。
　　 結果：
　　 1.LPS刺激NR8383細胞6h后，細胞生長緩慢、

3、貼壁能力減弱、部分細胞死亡，白藜蘆醇預處理細胞后，能減輕LPS對細胞的損傷作用、維持細胞的貼壁、促進細胞生長，并且對細胞的保護作用呈藥物劑量依賴性；
　　 2.LPS刺激NR8383細胞6h后，相對于PBS對照組，LPS處理組細胞中TNF-α mRNA的表達量升高了50.05±8.08倍(P<0.01)，培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白從26.15±13.43pg/ml上升到644.2±36.82pg/ml(P<0.01)、白藜蘆醇預

4、處理組(1μg/ml和10μg/ml)細胞中TNF-α mRNA的表達量分別升高了29.64±8.39倍(P<0.01)和13.54±4.50倍(P<0.01)，培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白分別上升到447.7±41.48pg/ml(P<0.01)和345.0±42.54pg/ml(P<0.01)；
　　 3.LPS刺激NR8383細胞6h后，相對于PBS對照組，LPS處理組細胞中miR-146a的表達升高了5.92±1.57(P

5、<0.01)，白藜蘆醇預處理組(1μg/ml和10μg/m1)細胞中miR-146a的表達分別升高了8.67±1.18倍(P<0.01)和11.17±1.40倍(P<0.01)；
　　 結論：
　　 白藜蘆醇預處理NR8383細胞后，能減輕LPS對細胞的損傷作用，抑制細胞釋放炎癥因子TNF-α，并上調細胞中miR-146a的表達。因此，我們推測在肺泡巨噬細胞炎癥反應中，白藜蘆醇可能通過上調miR-146a的表達，來負性調