脂氧素對脂多糖誘導巨噬細胞炎癥相關因子的影響及機制的研究.pdf

1、目的：研究脂氧素對脂多糖誘導的小鼠巨噬細胞株RAW264.7中相關炎癥因子（TNF-α，COX-2/PGE2）和TIR4受體的影響，并進一步探討其內(nèi)在分子機制。 方法：以1μg/ml的LPS刺激體外培養(yǎng)的RAW264.7細胞作為炎癥模型，細胞分成四組：（1）空白組：用PBS處理作為空白對照組；（2）LPS處理組：1μg/ml LPS處理；（3）LPS+脂氧素組：1μg/ml LPS加100ng/ml的脂氧素A4共同處理；（4）L

2、PS+脂氧素+ZnPPIX組：1μg/ml LPS加100ng/ml的脂氧素A4和100μM ZnPPIX共同處理。各組細胞在不同處理因素作用24小時后，酶聯(lián)免疫法測定上清中TNF-α，IL-10和PGE2濃度；免疫印跡法檢測細胞COX-2和HO-1的蛋白表達量；分光光度計分析HO-1的活性；流式細胞儀檢測細胞膜上TLR4。 結果： 1.LPS刺激細胞后，TNF-α的生成量明顯增加；脂氧素A4卻抑制LPS誘導細胞產(chǎn)生的T

3、NF-α；而ZnPPIX逆轉(zhuǎn)脂氧素A4對LPS誘導的TNF-α的產(chǎn)生的抑制作用。 2.LPS刺激細胞后，IL-10的生成量增加；脂氧素A4進一步增加IL-10的生成量；ZnPPIX干預后明顯減少脂氧素A4和LPS誘導巨噬細胞產(chǎn)生的IL-10。 3.LPS刺激后，COX-2蛋白表達明顯上調(diào)，細胞上清液中PGE2的生成量增加；脂氧素A4抑制LPS誘導的COX-2蛋白表達和PGE2的產(chǎn)生；ZnPPIX逆轉(zhuǎn)脂氧素A4對LPS誘導

4、的COX-2表達和PGE2的產(chǎn)生的抑制效應。 4.LPS刺激后，HO-1蛋白表達和激活增加；脂氧素A4進一步增強HO-1蛋白表達和激活；ZnPPIX可明顯減弱脂氧素A4對HO-1的激活，但卻不影響HO-1的表達。 5.LPS刺激可降低巨噬細胞膜上TLR4受體的含量；脂氧素A4進一步降低巨噬細胞膜表面TLR4受體含量；ZnPPIX可逆轉(zhuǎn)脂氧素A4對巨噬細胞膜表面TLR4受體的抑制作用。 結論：脂氧素A4可抑制LPS