低氧對脂多糖誘導的牙周膜細胞炎癥因子及OPG-RANKL表達的作用研究.pdf

1、牙周病是炎性骨吸收性疾病,其主要特征是牙齦、牙周韌帶、牙骨質(zhì)和牙槽骨因炎癥破壞最終導致牙齒松動和脫落,是最常見的口腔疾病之一。高原環(huán)境十分復雜,而缺氧則是高原最主要的變化。流行病學調(diào)查研究顯示:高海拔的高原環(huán)境下牙周炎的患病率顯著高于平原地區(qū)。在前期動物實驗研究中顯示:在模擬高原低氧條件下,牙周炎病程發(fā)展快、炎癥反應程度較重。牙周病原體及其代謝產(chǎn)物,特別是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),它能激發(fā)免疫細胞和局部鄰近

2、組織細胞增加炎性因子的表達進而誘導宿主發(fā)生一系列免疫反應從而誘發(fā)牙周組織損傷。LPS對牙周膜細胞的影響的研究都已經(jīng)較為廣泛和深入, LPS可以刺激牙周膜細胞分泌多種炎癥因子,如:IL-1,IL-6,IL-8,TNF-α,HSP60等等;同時,LPS可通過調(diào)節(jié)牙周膜細胞的OPG和RANKL的表達,從而影響牙周骨代謝。低氧也可以刺激牙周膜細胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1β和IL-6、 IL-8等細胞因子。低氧亦可以通過調(diào)節(jié)OPG和RANKL的表

3、達,刺激破骨,加重牙周炎。但低氧和LPS聯(lián)合對牙周膜細胞的影響目前還未見相關報道。同時,蛻皮甾酮作為一種毒副作用很小的中藥單體,先前研究顯示其對許多組織缺氧具有保護作用,我們嘗試探討蛻皮甾酮作為高原牙周病治療的可能性。為探討高原牙周病的致病機制,本課題選用組織塊結合酶消化法原代培養(yǎng)牙周膜細胞。在采用低氧及脂多糖聯(lián)合刺激牙周膜細胞后檢測TNF-α、IL-1β、IL-6、OPG及RANKL的表達。研究結果顯示:低氧及脂多糖均可誘導牙周膜細胞

4、炎癥因子表達,低氧還可增強脂多糖誘導的炎癥因子表達。同時添加NF-κB抑制劑 BAY11-7082能有效的抑制低氧增強的LPS誘導的炎癥因子表達;蛋白免疫印記實驗顯示:低氧增強了LPS誘導的胞核內(nèi)NF-κB及胞漿中I-κB蛋白表達,結果提示:NF-κB信號通路參與了低氧增強脂多糖誘導的炎癥因子表達。低氧條件下LPS誘導的OPG/RANKL比率會進一步降低從而影響牙周病的進展。同時蛻皮甾酮能增強牙周膜干細胞的成骨分化作用。此研究對初步探討

5、高原牙周病的機制研究具有一定的意義,同時對高原牙周病的治療也提供了新的思路。
　　主要研究內(nèi)容和結果
　　研究目的
　　1.牙周膜細胞的培養(yǎng)及鑒定。
　　2.低氧增強細菌脂多糖誘導的牙周膜細胞炎癥因子IL-6、IL-1β和TNF-α表達;
　　3.低氧增強細菌脂多糖誘導牙周膜細胞炎癥因子表達的機制研究。
　　4.低氧及細菌脂多糖對牙周膜細胞RANKL、OPG的表達;
　　5.蛻皮甾酮對牙周膜干細

6、胞增殖及成骨分化的作用。
　　研究結果
　　1.采用組織塊法培養(yǎng),能體外成功獲取人原代牙周膜細胞。
　　2.低氧及脂多糖均可誘導牙周膜細胞炎癥因子的蛋白表達,低氧可增強脂多糖誘導的牙周膜細胞炎癥因子蛋白表達,并且呈現(xiàn)劑量依賴性及時間依賴性。
　　3.低氧及脂多糖均可誘導牙周膜細胞炎癥因子的mRNA表達(P<0.05),低氧可增強脂多糖誘導的牙周膜細胞炎癥因子mRNA表達(P<0.05)。
　　4.NF-κB

7、抑制劑 BAY11-7082(20μM)能有效的抑制低氧增強的LPS誘導的牙周膜細胞炎癥因子表達(P<0.05),然而JNK生化抑制子SP600125; ERK生化抑制子PD98059;P38生化抑制子SB203580及HIF-α生化抑制子YC-1(30μM)則對抑制低氧增強的LPS誘導的牙周膜細胞炎癥因子表達作用不甚顯著(P>0.05)。
　　5.低氧或LPS均能顯著增強牙周膜細胞胞核內(nèi)NF-κB及胞漿中I-κB蛋白表達水平。并

8、且和LPS誘導的胞核內(nèi)NF-κB及胞漿中I-κB蛋白相比,低氧和LPS誘導的牙周膜細胞胞核內(nèi)NF-κB及胞漿中I-κB蛋白表達水平顯著更高。
　　6.與對照組相比,LPS和低氧均可顯著促進牙周膜細胞RANKL mRNA及蛋白表達(P<0.05),并且低氧可增強LPS誘導的RANKL mRNA及蛋白表達(P<0.05)。然而LPS和低氧誘導的OPG表達無明顯變化(P>0.05)。
　　5.蛻皮甾酮通過誘導BMP-2表達促進牙周