脂多糖預(yù)處理對低氧誘導(dǎo)小鼠表達HIF-1α的影響.pdf

1、1脂多糖預(yù)處理對細胞性低氧小鼠巨噬細胞表達HIF-1α和VEGF的影響。
　　目的：
　　觀察致炎因子脂多糖預(yù)處理對低氧狀態(tài)誘導(dǎo)巨噬細胞在體外表達HIF-1α和VEGF的影響。
　　方法：
　　培養(yǎng)小鼠巨噬細胞Raw264.7，采用CCK8法觀察細胞在LPS和CoCl2作用下經(jīng)不同時間培養(yǎng)后的增值情況，再將細胞分為以下4組:正常對照組（無處理因素），LPS(1mg/L)組，CoCl2(100μmol/L)組，LP

2、S(1mg/L)預(yù)處理組(LPS-Pre，LPS作用8h后再給予CoCl2刺激)。采用RT-PCR檢測LPS和CoCl2對Raw264.7表達HIF-1α和VEGF mRNA的影響;采用免疫細胞化學(xué)方法在鏡下定性觀察HIF-1α和VEGF蛋白在細胞的表達情況，采用Western blot定量檢測HIF-1α和VEGF蛋白表達水平的變化。
　　結(jié)果：
　　(1) CCK8數(shù)據(jù)顯示LPS和CoCl2對Raw264.7細胞增殖的影

3、響均在8h后趨向穩(wěn)定;
　　(2) RT-PCR結(jié)果顯示，與對照組比較，CoCl2組和LPS-Pre組表達HIF-1αmRNA和VEGF mRNA均增加(P＜0.05)，其中，LPS-Pre組表達水平高于CoCl2組(P＜0.05);
　　(3) DAB染色和Western blot檢測結(jié)果顯示，與對照組比較，LPS組，CoCl2組，LPS-Pre組表達HIF-1α和VEGF蛋白均增加(P＜0.05)，其中，LPS-Pre組

4、表達水平高于CoCl2組(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　LPS預(yù)處理能在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)CoCl2刺激的巨噬細胞表達HIF-1α和VEGF。
　　2脂多糖預(yù)處理對低張性低氧小鼠肺組織表達HIF-1α的影響。
　　目的：
　　觀察致炎因子脂多糖預(yù)處理對低氧狀態(tài)誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)肺組織表達HIF-1α的影響。
　　方法：
　　將雄性ICR（SPF級）小鼠隨機分為正常對照組（無處理因素），LPS組，

5、低氧組，LPS預(yù)處理組(LPS-Pre組)。對照組無任何處理因素，給予低氧組咽后壁吸入生理鹽水（50μL），給予LPS組和LPS-Pre組咽后壁吸入LPS（50μL，2g/L）。將低氧組和LPS預(yù)處理組小鼠放置于缺氧瓶中給予持續(xù)低氧處理2.5h后，處死小鼠，同時也處死未作低氧處理的對照組和LPS組小鼠，各組小鼠經(jīng)解剖取出完整肺臟稱取肺濕重，計算肺系數(shù);取部分肺組織經(jīng)HE染色進行組織病理學(xué)觀察;部分肺組織經(jīng)RT-PCR法檢測各組HIF-1

6、α mRNA的表達水平、并以Western blot法檢測各組HIF-1α蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：
　　(1)吸入LPS的兩組小鼠肺系數(shù)明顯增高，HE染色顯示肺內(nèi)明顯炎癥細胞浸潤，部分肺組織發(fā)生炎性實變;
　　(2) RT-PCR結(jié)果顯示， LPS-Pre組HIF-1α mRNA表達明顯高于對照組;也明顯高于LPS組和低氧組(P＜0.05)
　　(3) Western blot結(jié)果顯示，與對照組比較， LPS