康萊特注射液聯(lián)合放療對Lewis肺癌小鼠MDSC、HIF-1α表達的影響.pdf

1、目的:手術、放射治療、化學治療等傳統(tǒng)惡性腫瘤治療方法難以解決惡性腫瘤的復發(fā)轉(zhuǎn)移問題。腫瘤微環(huán)境的改變是腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的關鍵。中醫(yī)藥能夠個體化、多層次、多靶點控制腫瘤生長、對抗轉(zhuǎn)移、減少復發(fā)，與放化療結合，能夠增效減毒。臨床實踐中發(fā)現(xiàn)放療聯(lián)合康萊特注射液(Kanglaite，KLT)具有增效減毒作用。關于KLT對腫瘤微環(huán)境的影響研究報道不多。本研究通過檢測KLT對Lewis肺癌小鼠放療敏感性的影響，進一步探討KLT對髓系抑制細胞(myelo

2、id-derived suppressor cells，MDSC)的數(shù)目及缺氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）表達的影響，進一步分析KLT的作用機制。
　　方法:
　　1、體外培養(yǎng)Lewis肺癌細胞，取傳至3-4代生長好的細胞接種于小鼠左腋皮下，建立Lewis肺癌移植瘤模型。觀察記錄小鼠的一般情況，如體重、進食、活動、毛發(fā)等情況。待腫瘤最長徑為0.8-1cm時，挑選腫瘤大

3、小較均一的荷瘤小鼠24只，隨機分為對照組(control)、康萊特組（KLT）、放療組(RT)及康萊特聯(lián)合放療組（KLT+RT）4組，每組6只，生理鹽水(NS)處理組作為對照組，分別用KLT、NS+RT、KLT+RT處理;選取6只大小較均一的健康小鼠作為健康對照組(NC)。
　　2、各組小鼠干預處理結束后，脫頸方法處死小鼠，稱取小鼠的體重，完整剝離小鼠瘤組織及脾臟、肺臟，并測量瘤體大小。
　　3、采用實時熒光定量PCR(re

4、al-time PCR，RT-PCR)技術檢測各組小鼠瘤體和肺組織中HIF-1α基因表達。
　　4、采用流式細胞技術(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測各組小鼠脾臟、瘤體中MDSC的數(shù)目及比例。
　　5、采用SPSS17.0軟件包建立數(shù)據(jù)庫，將相關資料結果錄入數(shù)據(jù)庫，進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(％)表示，計量資料用(x)±s表示。多組樣本間均數(shù)比較應用單因素方差分析，組間多重比較應用LSD檢驗，各檢驗均以P＜0.05

5、為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、各組小鼠一般情況:小鼠皮下接種Lewis肺癌細胞后約1周建模成功，約14天腫瘤生長最長徑為1.5-2.0cm。荷瘤小鼠進食、活動、毛發(fā)等一般情況逐漸變差，對照組小鼠最明顯。
　　2、各組對荷瘤小鼠的抑瘤效應:對照組、KLT組、RT組、KLT+RT組平均腫瘤體積分別為（6.78±0.90）cm3、（6.52±0.92）cm3、（0.87±0.53）cm3、（0.08±0.30）c

6、m3，三個治療組的腫瘤體積均低于對照組，與對照組相比，KLT組小鼠腫瘤體積縮小，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），RT組、KLT+RT組小鼠腫瘤體積縮小，均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;與KLT組相比，RT組、KLT+RT組腫瘤體積縮小更明顯，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與RT組相比，KLT+RT組腫瘤體積縮小更明顯，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)(Table2)
　　3、各組小鼠腫瘤組織、肺組織中HIF-1α的基因表達的比較:健康

7、對照小鼠肺組織中不表達HIF-1α基因，Lewis肺癌小鼠瘤組織、肺組織中均表達HIF-1α基因，而腫瘤組織中HIF-1α基因的表達明顯高于肺組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);實時熒光定量分析顯示，與NS組相比，KLT組小鼠瘤組織中HIF-1α基因表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;RT組HIF-1α基因表達水平增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);KLT+RT組表達亦較低，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與KLT+RT組

8、相比，KLT組HIF-1α基因表達更低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)(Fig.3-8，Table3)。
　　4、各組小鼠腫瘤組織、脾臟組織中MDSC百分比的比較:健康對照小鼠脾臟中幾乎無MDSC表達，而Lewis肺癌小鼠脾臟、瘤組織中均存在MDSC表達，且瘤組織中MDSC表達較脾臟中高;流式分析結果顯示，與NS組相比，KLT組小鼠脾臟、瘤組織中MDSC百分比顯著較低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，RT組脾臟及瘤組織中MDS

9、C百分比略升高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);KLT+RT組脾臟、瘤組織中MDSC百分比降低，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與KLT+RT組相比，KLT組脾臟、瘤組織中MDSC百分比降低更顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）(Fig.9-17，Table4)。
　　結論:
　　1、KLT可抑制Lewis肺癌小鼠腫瘤生長、增強小鼠免疫功能、改善缺氧狀態(tài)，其機制可能與抑制MDSC、HIF-1αmRNA表達有關。