蝎毒多肽提取物對實驗性肺癌VEGF、HIF-1α和PTEN表達的影響.pdf

1、研究背景：
　　 肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮。其死亡率自70年代至90年代上升幅度達111.85％，是所有惡性腫瘤中之最高，其中非小細胞肺癌占肺癌總數(shù)的80％，是最為常見的肺癌病理類型[1]。目前可供選擇的治療方法有限，導致肺癌死亡率高，平均5年生存率不到15％[2-4]。
　　 以腫瘤血管為靶點，開發(fā)具有抗血管生成作用的中藥是一個十分活躍的研究領域。腫瘤血管生成過程中多種血管生成因

2、子相互影響，尋找一種對腫瘤血管生成中多種血管生成因子具有靶向調節(jié)作用的藥物是腫瘤抗血管生成治療中亟待解決的關鍵問題之一。中醫(yī)中藥在抗腫瘤血管生成中有其獨特的優(yōu)勢。蝎毒多肽提取物(polypeptideextractfromscorpionvenom，PESV)是本實驗室從東亞鉗蝎的蝎毒中提取并分離純化的有效抗腫瘤成分，具有多種生物活性。當前實驗研究已證明它可抑制人臍靜脈內皮細胞的增殖并可抑制雞胚尿囊膜新生血管的生成，但其抗腫瘤血管生成的

3、機制尚未完全闡明。本研究通過體內外實驗觀察PESV對腫瘤血管生成中VEGF、HIF-1α和PTEN表達的影響，探討其抑制腫瘤血管生成的作用機制。
　　 目的：
　　 通過體外實驗觀察PESV對人肺癌A549細胞的細胞毒作用和對VEGF、HIF-1α和PTEN表達的影響，體內實驗觀察PESV對肺癌裸鼠移植瘤生長的影響及對VEGF、HIF-1α、PTEN基因和蛋白表達的影響，以揭示PESV抗腫瘤血管生成的作用機制，尋求中藥抗

4、腫瘤血管生成治療非小細胞肺癌的新策略。
　　 方法：
　　 1.采用噻唑藍(MTT)法檢測PESV對人A549細胞生長與增殖的影響，并根據(jù)吸光度值計算各藥物濃度的細胞增殖抑制率。下游實驗根據(jù)IC50值將對數(shù)生長期的A549細胞分為陰性對照組、PESV小劑量組、PESV中劑量組、PESV大劑量組，應用免疫細胞化學法、Westernblot法檢測PESV干預后VEGF、HIF-1α和PTEN蛋白表達的變化。
　　 2

5、.構建裸鼠移植瘤模型，實驗用裸鼠共18只，隨機分為3組:荷瘤對照組、高劑量組和低劑量組。PESV隔日給藥(灌胃法)一次，對照組給等體積的生理鹽水。測量腫瘤體積并計算抑瘤率，繪制腫瘤體積生長曲線，觀察PESV對腫瘤生長的抑制作用，實驗共進行21天。
　　 3.通過RT-PCR法、Westemblot法檢測各處理組裸鼠移植瘤內血管生成調控因子VEGF、HIF-1α和PTEN的表達水平。
　　 結果：
　　 1.PES

6、V對人A549細胞生長與增殖的影響
　　 PESV濃度在25～200μg/mL時，對A549細胞增殖抑制作用明顯，與陰性對照組相比，p均＜0.01。25～200μg/mL劑量組之間兩兩比較差異顯著，p均＜0.01，總體呈劑量一效應關系，r=0.966，p＜0.01。
　　 2.PESV對人A549細胞中VEGF、HIF-1α和PTEN表達的影響。
　　 免疫細胞化學法結果顯示，PESV干預后A549細胞VEGF、

7、HIF-1α的表達明顯下調，各濃度組間比較(p＜0.05或p＜0.01)。PTEN的表達呈上升趨勢，各組間比較(p＜0.05或p＜0.01)。Westemblot法結果與免疫細胞化學法的結果基本一致。
　　 3.PESV對肺癌裸鼠移植瘤生長的影響
　　 PESV干預21天后，與荷瘤對照組相比，PESV高劑量組裸鼠腫瘤生長明顯受到抑制，抑瘤率達40.36％(p＜0.01);PESV低劑量組抑瘤率為20.15％，差異亦有統(tǒng)計

8、學意義(p＜0.05)。
　　 4.PESV對肺癌裸鼠移植瘤中VEGF、HIF-1α和PTEN表達的影響
　　 RT-PCR法檢測結果顯示，PESV干預后腫瘤組織中VEGF和HIF-1α表達水平明顯降低，各組間比較(p＜0.05或p＜0.01)，PTEN的表達明顯升高，各組間比較(p＜0.05或p＜0.01)。Westemblot法結果與RT-PCR法的結果基本一致。
　　 結論：
　　 1.PESV可抑