射干麻黃湯對(duì)哮喘大鼠中HIF-1α,VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察哮喘大鼠中缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平(VEGF),并分析兩者之間的關(guān)系及其對(duì)氣道重塑的影響,同時(shí)探討射干麻黃湯治療支氣管哮喘的可能作用機(jī)制。
　　方法：50只SD大鼠隨機(jī)平均分為5組,每組10只:哮喘模型組(A組)、射干麻黃湯0.16g組(B組)、射干麻黃湯0.32g組(C組)、射干麻黃湯0.64g組(D組)、正常對(duì)照組(E組)5組。A、B、C、D組以腹腔注射卵蛋白(OVA)及Al(OH)3懸

2、濁液1ml(內(nèi)含OVA1mg和Al(OH)3100mg)致敏及反復(fù)霧化吸入含1％OVA的生理鹽水激發(fā)建立大鼠哮喘模型,E組則予以1ml生理鹽水腹腔注射及霧化吸入。B、C、D三組激發(fā)前30分鐘分別予以射干麻黃湯1ml灌胃(分別含射干麻黃湯0.16g、0.32g、0.64g)進(jìn)行干預(yù), A、E兩組同時(shí)予以等量生理鹽水灌胃,最后一次激發(fā)24h后處死大鼠。常規(guī)病理切片觀察各組大鼠肺內(nèi)炎癥浸潤情況、測量各組大鼠氣管總管壁厚度、氣管內(nèi)管壁厚度及氣道

3、平滑肌厚度。RT-PCR檢測大鼠肺組織HIF-1α, VEGF的mRNA的表達(dá),免疫組化檢測氣道壁HIF-1α,VEGF蛋白的表達(dá)情況。比較各組大鼠HIF-1α和VEGF的表達(dá)差異,分析HIF-1α與VEGF的關(guān)系,HIF-1α與VEGF、氣道壁厚度的關(guān)系,射干麻黃湯劑量與抑制氣道重塑程度的關(guān)系。
　　結(jié)果：大鼠肺組織常規(guī)病理切片,于顯微鏡下觀察,可見 A組大鼠氣道支氣管及血管周圍存在大量炎癥細(xì)胞浸潤,以嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主

4、,氣道平滑肌增厚,基底膜增厚,管腔狹窄,粘膜下細(xì)胞外基質(zhì)沉積,B、C、D組上述改變較輕,E組無上述改變。圖像分析顯示 A組總氣管壁(Wat)、氣管內(nèi)壁(Wai)及氣道平滑肌層(Wam)較E組明顯增厚,B、C、D組介于兩者之間。氣管壁各層厚度標(biāo)化值分別為 Wat/Pbm(μm2/μm)(A組68.19±4.48、B組56.16±2.98、C組50.32±2.06、D組46.73±3.52、E組34.76±1.38),Wai/Pbm(μm2

5、/μm)(A組38.2±1.62、B組29.33±1.75、C組26.07±1.95、D組23.35±1.56、E組16.25±2.20), Wam/Pbm(μm2/μm)(A組7.61±1.33、B組6.20±0.80、C組4.87±0.93、D組3.68±0.45、E組2.89±0.45)。A、B、C、D、E各組數(shù)據(jù)相比較,差異均有顯著性(P<0.05)。
　　免疫組化蛋白半定量分析,A組HIF-1α、VEGF蛋白的積分光密度

6、值(IOD)較E組明顯增高,B、C、D組IOD值介于兩者之間。各組HIF-1α的IOD值分別為:A組82.48±7.00、B組73.84±3.79、C組71.74±4.96、D組68.69±2.73、E組58.10±3.93。各組VEGF的IOD值分別為:A組94.30±7.33、B組87.09±6.20、C組81.80±6.68、D組77.25±4.79、E組70.67±5.54。B、C、D組HIF-1α、VEGF的IOD值與A組及E

7、組相比較,差異有顯著性(P<0.05)。B組和C組之間比較,差異沒有顯著性(P>0.05),C組和D組之間比較,差異沒有顯著性(P>0.05),B組和D組之間比較,差異有顯著性(P<0.05)。
　　RT-PCR半定量分析,A組HIF-1α、VEGFmRNA相對(duì)灰度值較E組明顯增高,B、C、D組介于兩者之間。各組HIF-1αmRNA相對(duì)灰度值分別為:A組0.60±0.06、B組0.50±0.06、C組0.45±0.05、D組0.4

8、1±0.05、E組0.29±0.04。各組 VEGFmRNA相對(duì)灰度值分別為:A組0.72±0.07、B組0.60±0.07、C組0.56±0.06、D組0.51±0.04、E組0.44±0.05。B、C、D組相對(duì)灰度值與A組及E組相比較,差異有顯著性(P<0.05)。B組和C組之間比較,差異沒有顯著性(P>0.05),C組和D組之間比較,差異沒有顯著性(P>0.05),B組和D組之間比較,差異有顯著性(P<0.05)。
　　相關(guān)

9、性分析顯示,哮喘模型大鼠支氣管上皮VEGF與HIF-1α蛋白的積分光密度值呈正相關(guān),VEGFmRNA與HIF-1αmRNA相對(duì)灰度值呈正相關(guān), VEGF與HIF-1α的表達(dá)與Wat、Wai、Wam的標(biāo)化值呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：1、HIF-1α,VEGF表達(dá)水平與氣道重塑程度之間呈正相關(guān), HIF-1α, VEGF可能參與了哮喘大鼠的氣道重塑。
　　2、射干麻黃湯可以下調(diào)HIF-1α,VEGF的表達(dá),其抑制氣道重塑程度與射干麻