在缺氧微環(huán)境中姜黃素對(duì)PANC-1中HIF-1α和VEGF基因表達(dá)的影響.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究目的:
   觀察缺氧微環(huán)境中人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1(體外培養(yǎng))經(jīng)過姜黃素干預(yù)后HIF-1α和VEGF基因表達(dá)情況,深入研究姜黃素對(duì)體外胰腺癌細(xì)胞中HIF-1α和VEGF表達(dá)的抑制機(jī)制。
   研究方法:
   1.體外培養(yǎng)PANC-1,在缺氧微環(huán)境中利用各姜黃素劑量組(0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L)干預(yù)PANC-1,作用24h后,倒置相差顯微鏡

2、觀察對(duì)照組和不同劑量的藥物組干預(yù)后PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況。
   2.MTT法檢測(cè)對(duì)照組和不同劑量的藥物組(0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/mL、10μmol/L、100μmol/L)對(duì)PANC-1作用24h、48h、72h、96h后的細(xì)胞生存率,并以曲線圖直觀表示。
   3.RT-PCR檢測(cè)PANC-1在缺氧條件下姜黃素干預(yù)24h后HIF-1α和VEGF的mRNA表達(dá)情況。
   4.EL

3、ISA檢測(cè)缺氧及姜黃素作用于胰腺癌細(xì)胞24h后HIF-1α的蛋白表達(dá)情況。
   研究結(jié)果:
   1.倒置相差顯微鏡下觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn):缺氧微環(huán)境中姜黃素對(duì)PANC-1細(xì)胞作用24h后,各劑量組細(xì)胞數(shù)目與對(duì)照組相比無(wú)明顯減少,各劑量組之間比較,無(wú)明顯差異,細(xì)胞貼壁率在90%—95%之間。
   2.MTT法檢測(cè)結(jié)果表明:姜黃素對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1細(xì)胞有抑制作用,在作用24h后,隨著姜黃素劑量的增加,抑制作用無(wú)

4、明顯差異,不同劑量組之間的細(xì)胞生存率在95%左右,隨時(shí)間的增加(48h、72h、96h),抑制作用逐漸明顯。
   3.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明:藥物組HIF-1α的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比,無(wú)明顯差異,實(shí)驗(yàn)組間也無(wú)明顯變化,然而作用后藥物組VEGF的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比,有明顯抑制,組間可見顯著差異,具有明顯的劑量依賴性。
   4.ELISA法檢測(cè)結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)組HIF-1α蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較明顯降

5、低(F=138.43,P<0.01),且有明顯的劑量依賴性,隨著藥物劑量的增大而逐漸降低。
   研究結(jié)論:
   1.姜黃素可以抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1生長(zhǎng)增殖,但24h內(nèi)貼壁細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)無(wú)明顯變化,隨著藥物劑量、作用時(shí)間(48h,72h,96h)的增加,抑制作用逐漸明顯。
   2.姜黃素抑制HIF-1α蛋白的合成,不是依靠抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖及誘導(dǎo)其凋亡程序,而是依賴作用于轉(zhuǎn)錄后機(jī)制影響表達(dá)的。

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