HIF-1α及VEGF在缺氧缺血胎鼠腦組織中表達(dá)的研究.pdf

1、目的:利用宮內(nèi)缺氧缺血性腦損傷動(dòng)物模型,探討腦損傷后不同復(fù)氧時(shí)間胎鼠腦組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在mRNA和蛋白水平的表達(dá)規(guī)律。
　　 方法:將32只孕19天Wistar大鼠,按受孕先后順序分為1個(gè)對(duì)照組及7個(gè)實(shí)驗(yàn)組,每組4只。在水合氯醛麻醉下行開腹,暴露雙側(cè)子宮,對(duì)照組只暴露雙側(cè)子宮15分鐘,隨即取胎鼠腦組織;實(shí)驗(yàn)組央閉子宮動(dòng)脈15分鐘,即建立宮內(nèi)缺氧缺血性腦損傷動(dòng)物模型,分別于雙側(cè)

2、子宮恢復(fù)血供后0、2、4、8、12、24及48小時(shí)取胎鼠腦組織。應(yīng)用HE染色光鏡下進(jìn)行病理觀察,以確定動(dòng)物模型是否建立成功。應(yīng)用Real-Time PCR方法檢測(cè)HIF-1α及VEGF的mRNA表達(dá);應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HIF-1α及VEGF的蛋白表達(dá)定位。
　　 結(jié)果:1.HE染色光鏡下結(jié)果:對(duì)照組未見明顯病理改變;實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞體腫脹,細(xì)胞排列紊亂等病理改變,可見動(dòng)物模型建立成功。2.Real-TimePCR檢測(cè)

3、結(jié)果:對(duì)照組及各實(shí)驗(yàn)組均檢測(cè)到HIF-1α及VEGF mRNA。(1)HIF-1α mRNA在對(duì)照組的2(-△△Ct)值為1.025±0.263:在0、2及4小時(shí)組的2(-△△Ct)值分別是1.067±0.267、1.240±0.372及1.176±0.280,三組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在8及12小時(shí)組的2(-△△Ct)值分別為1.375±0.273及1.450±0.151,兩組與對(duì)照組比較,明顯升高:在24及48小時(shí)組的2(-△△

4、Ct)值分別為0.954±0.116及0.989±0.222,兩組與12小時(shí)組比較,明顯降低,與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)VEGF mRNA在對(duì)照組的2(-△△Ct)值為1.004±0.097,;在0、2及4小時(shí)組的2(-△△Ct)值分別是1.027±0.477,1.279±0.176及1.373±0.337,三組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在8及12小時(shí)組的2(-△△Ct)值分別為1.524±0.217及1.770±0.359,兩組

5、與對(duì)照組比較,P＜0.05,明顯升高;在24及48小時(shí)組的2(-△△Ct)值分別為1.062±0.272及1.073±0.053,兩組與12小時(shí)組比較,P＜0.05,明顯降低,與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.免疫組織化學(xué)法檢測(cè):(1)對(duì)照組HIF-1α蛋白幾乎不表達(dá),實(shí)驗(yàn)組HIF-1α蛋白主要在大腦皮層及海馬等區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞核及細(xì)胞漿中表達(dá)。VEGF在大腦皮層及海馬等去神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞漿中表達(dá)。(2)HIF-1α蛋白在對(duì)照組平均光密度

6、值為0.2902±0.0223,在0、2及4小時(shí)組的平均光密度值分別是0.2994±0.04176,0.3060±0.04053及0.3086±0.03960,三組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在8及12小時(shí)組的平均光密度值分別為0.3276±0.00631及0.3638±0.02168,兩組與對(duì)照組比較,P＜0.05,明顯升高;在24及48小時(shí)組的平均光密度值分別為0.2856±0.00814及0.2808±0.00415,兩組與12小時(shí)

7、組比較,P＜0.05,明顯降低,與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)VEGF蛋白在對(duì)照組平均光密度值為O.2034±0.0053,在0、2及4小時(shí)組的平均光密度值分別是0.2096±0.0057,0.2070±0.0059及0.2096±0.0079,三組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在8及12小時(shí)組的平均光密度值分別為0.2280±0.0093及0.2479±0.0077,兩組與對(duì)照組比較,P＜0.05,明顯升高;在24及48小時(shí)組的平均光密