HIF-1αsiRNA干擾缺氧誘導人肝癌細胞HIF-1α及血管生成因子的表達.pdf

1、研究背景：在腫瘤的生長過程中，血管生成起著關(guān)鍵的作用，它提供豐富的養(yǎng)分和營養(yǎng)物質(zhì)；并且為腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。腫瘤細胞釋放的促血管生成因子作用于宿主內(nèi)皮細胞，促進新血管的生成。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和酪氨酸激酶受體((KDR)在血管生成中起著重要作用。而血管的成熟和穩(wěn)定又主要靠酪氨酸受體另一種亞家族Tie2和其配體血管生成素(Angiopioetins)維持。這兩條信號傳導途徑是目前認為最直接參與新血管生成的血管內(nèi)皮細胞特異的

2、途徑，在腫瘤的血管生成中相互作用。 缺氧是許多實體腫瘤的常見現(xiàn)象，是間質(zhì)血管系統(tǒng)無法滿足腫瘤生長時出現(xiàn)。缺氧微環(huán)境使腫瘤細胞的一些基因和蛋白表達發(fā)生改變。這些變化使腫瘤細胞在適應缺氧微環(huán)境的同時，也會導致腫瘤自身的生物學特性和表形的改變。在這個過程中轉(zhuǎn)錄因子H1F-l調(diào)節(jié)大量與之相關(guān)分子改變。己明確VEGF是HIF-l的重要靶基因之一。 肝癌具有生長快、轉(zhuǎn)移早和死亡率高的特性：也是一種強的血管依賴性腫瘤。血管生成是其惡性

3、化的第一步，而眾多的促血管生成因子和抗血管生成因子參與了血管生成的過程。因此，以血管生成信號傳導通路為靶向的抗血管治療可能是一種很有潛力的抗腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移和術(shù)后復發(fā)的治療方法。但是，在血管生成過程中，許多信號傳導分子機制目前還不清楚。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是近年興起的高效且特異特定基因的新技術(shù)，主要是將21bp的小干擾RNA(small refererlceRNA，siRNA)轉(zhuǎn)染進細胞，通過序列特異的降

4、解作用，能有效封閉靶mRNA和降低蛋白質(zhì)水平。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)方法、蛋白印記方法、免疫組化方法和siRNA等方法研究肝癌組織和細胞中HIF-lα、VEGF、Angiopoietin-2的表達，目的是探索在肝癌中微環(huán)境缺氧與促血管生成細胞因子間作用的分子機理，并為肝癌治療尋找新的作用位點和治療途徑。目的：探討HIF-lα、VEGF、Angiopoietin-2在原發(fā)性肝細胞癌中的表達，以及與臨床病理因素及相互的關(guān)系。 方法

5、：用免疫組化法檢測43例原發(fā)性肝細胞癌中HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2的表達情況，探討HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2與肝癌血管生成等臨床病理因素的關(guān)系。另取7例正常肝組織作為對照。 結(jié)果：在43例肝癌標本中，HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2蛋白陽性表達分別為: 60.5％、65.1％、79.1％。而7例正常的肝組織陽性表達分別為：14.2％、14.2％、14.2％。

6、在肝癌組織中HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2蛋白陽性表達差異具有顯著性(P<0.05)，HIF-1α蛋白表達與腫瘤的大小、分化程度有關(guān)，VEGF蛋白表達與肝癌的分化程度、有無靜脈或膽道癌栓有關(guān)，Angiopoietin-2蛋白表達腫瘤的大小、有無門靜脈、膽道癌栓有關(guān)。HIF-lα、VEGF、Angiopoietin-2蛋白陽性表達呈正相關(guān)性。 結(jié)論： 1：HIF-1α在HCC中表達強于正常組織。HIF

7、-lα表達與腫瘤的大小、分化程度有關(guān)；而與HBsAg、門靜脈癌栓的有無無明顯相關(guān)性。 2：Angiopoietin-2僅在HCC中表達。其表達與分化程度、門靜脈癌栓有關(guān)；而與腫瘤的大小、HBsAg的有無無明顯相關(guān)性。 3：VEGF在ItCC中表達強于正常組織。其表達與腫瘤的大小、門靜脈癌栓有關(guān)；而與分化程度、HBsAg的有無無明顯相關(guān)性。 4．HCC組織存在著HIF-1α，Angiopoietin-2，VEGF蛋