shRNA干擾HIF-1α對人宮頸癌HeLa細(xì)胞HIF-1α表達(dá)及細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡的影響研究.pdf

1、背景和目的：乏氧可以通過影響腫瘤細(xì)胞的周期分布和凋亡來影響腫瘤的放療敏感性，乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha，HIF-1α)在乏氧引起的放療抵抗中起了中樞調(diào)節(jié)作用。本研究采用RNA干擾技術(shù)抑制人宮頸癌HeLa細(xì)胞HIF-1α的表達(dá)，研究shRNA干擾HIF-1α對HeLa細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡的影響,并分析乏氧對人宮頸癌HeLa細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡的影響是否與HIF-1α有關(guān)。

2、>　　 方法：將人宮頸癌HeLa細(xì)胞株、轉(zhuǎn)染HIF-1α-shRNA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞株及轉(zhuǎn)染pGenesil-1空白質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞株分別1％O2低氧培養(yǎng)(0h、12h和24h)，應(yīng)用Western blot檢測三組細(xì)胞HIF-1α蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測上述三種細(xì)胞不同乏氧時間點的周期分布及凋亡情況。采用統(tǒng)計學(xué)軟件SSPS16.0行t檢驗及方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：Western

3、blot分析顯示三組細(xì)胞HIF-1α蛋白的表達(dá)量隨著乏氧時間的延長而逐漸增加，差異均具有顯著性(P<0.01)，HIF-1α-shRNA/HeLa細(xì)胞HIF-1a蛋白的表達(dá)量在不同的乏氧處理時間點與pGenesil-1/HeLa細(xì)胞及HeLa細(xì)胞分別進(jìn)行比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布三組細(xì)胞隨著乏氧時間延長G0/G1期細(xì)胞比例逐漸增加(P<0.01)，S期細(xì)胞比例逐漸減少(P<0.01)，即出現(xiàn)G1

4、/S期阻滯的現(xiàn)象，抑制HIF-1α的表達(dá)以后，G1/S期阻滯的現(xiàn)象有所減弱。流式細(xì)胞術(shù)測凋亡率顯示各組細(xì)胞在乏氧后凋亡率均有所增加，差異具有顯著性(P<0.05)，HIF-1α-shRNA/HeLa細(xì)胞的凋亡率不管是常氧組還是乏氧24h組均高于pGenesil-1/HeLa細(xì)胞和HeLa細(xì)胞，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。pGenesil-1/HeLa細(xì)胞與HeLa細(xì)胞之間在HIF-1a蛋白表達(dá)水平、G1/S阻滯程度和凋亡率上的