RNA干擾HIF-1α對宮頸癌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)影響的研究.pdf

1、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha，HIF1-α)是普遍存在于實(shí)體瘤組織中的缺氧應(yīng)答調(diào)控因子，在維持細(xì)胞能量代謝、腫瘤血管生成、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、細(xì)胞增殖與凋亡等諸多方面起著重要作用。本研究探討RNA干擾HIF-1α對基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)在子宮頸癌HeLa細(xì)胞中表達(dá)的影響，初步探討其機(jī)理。 方法： 1 將15只裸

2、鼠隨機(jī)分為三組，空白對照組用HeLa細(xì)胞接種，陰性對照組用pGenesil-1-HeLa細(xì)胞接種，實(shí)驗(yàn)組用HIF-1α-HeLa細(xì)胞接種； 2 用免疫組織化學(xué)法檢測各組移植瘤組織中HIF-1α，上皮細(xì)胞鈣粘蛋白(E-cadherin)，鈣緊張素(β-catenin)和MMP-2的表達(dá)； 3 將HeLa細(xì)胞，轉(zhuǎn)染pGenesil-1空白質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞(pGenesil-1-HeLa細(xì)胞)、轉(zhuǎn)染HIF-1α-shRNA質(zhì)

3、粒的HeLa細(xì)胞(HIF-1α-HeLa細(xì)胞)分別在乏氧條件下(1％O2)及常氧(21％O2)條件下培養(yǎng)48 h，用western blot法檢測各組細(xì)胞中HIF-1α、E-cadherin、β-catenin和MMP-2的表達(dá)。 結(jié)果： 1 免疫組化法分析各組移植瘤組織中HIF-1α，E-cadherin，β-catenin和MMP-2的表達(dá)，空白對照組分別為(69.0±12.1)％，(17.0±3.6)％，(56.0

4、±7.9)％，(60.0±5.0)％；陰性對照組分別為(62.8±12.3)％，(19.0±5.9)％，(53.0±6.9)％，(58.0±7.4)％；實(shí)驗(yàn)組分別為(17.4±8.8)％，(51.0±9.9％，(24.0±2.6)％，(23.0±4.6)％； 2 三種細(xì)胞中HIF-1α與MMP-2的表達(dá)存在正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.521(P=0.035)； 3 western blot分析，HeLa細(xì)胞和pGenesi

5、l-1-HeLa細(xì)胞乏氧48 h時(shí)HIF-1α，β-catenin，MMP-2蛋白高表達(dá)，而E-cadherin蛋白低表達(dá)，HIF-1α-HeLa細(xì)胞在乏氧和常氧48 h時(shí)β-catenin和MMP-2蛋白低表達(dá)，而E-cadherin蛋白高表達(dá)，HeLa細(xì)胞、pGenesil-1-HeLa細(xì)胞和HIF-1α-HeLa細(xì)胞在常氧48 h時(shí)及HIF-1α-HeLa細(xì)胞在乏氧48 h時(shí)HIF-1α蛋白低表達(dá)。 結(jié)論： 在人宮