蝎毒多肽提取物對HepG2肝癌血管生成抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 研究蝎毒多肽提取物對腫瘤微環(huán)境中血管生成相關因子VEGF、HPA、survin、CD34表達的影響，觀察對HepG2肝癌生長的抑制作用，進一步探討其抗血管生成的分子機制，揭示PESV的抗腫瘤作用機理，為肝癌的治療提供理論依據(jù)，從而將PESV與傳統(tǒng)的化療藥物相結合。
　　 方法：
　　 1.MTT法檢測細胞增殖抑制率，流式細胞術檢測細胞周期變化。
　　 2.建立HepG2肝癌皮下種植瘤模型，將

2、荷瘤動物隨機分為荷瘤對照組、PESV組和陽性對照組，陽性對照組采用順鉑作為陽性對照藥物，檢測腫瘤體積并計算抑瘤率，觀察PESV對腫瘤生長的抑制作用。
　　 3.常規(guī)HE染色，觀察腫瘤組織病理變化。
　　 4.免疫組化法檢測腫瘤組織血管內皮生長因子(VEGF)、乙酰肝素酶(HPA)、survin、CD34的表達。
　　 5.Westem-blot方法檢測瘤組織血管內皮生長因子(VEGF)、乙酰肝素酶(HPA)、su

3、rvivin的表達。
　　 結果：
　　 1.PESV對細胞增殖抑制率及細胞周期的影響
　　 與陰性對照組相比，PESV＜20μg·mL-1時，作用于HepG2肝癌細胞48h后，抑制增殖作用不明顯。但當PESV＞40μg·mL-1時，抑制增殖作用明顯增強，與陰性對照組相比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。20～100μg.mL-1劑量組之間兩兩比較差異顯著均，P＜0.05，總體呈劑量.效應關系。流式細胞術結果顯示

4、，PESV能使細胞周期阻滯于G0/G1期，減少S期及G2/M期的細胞比例，與陰性對照組相比，P＜0.05，順鉑組與PESV組相比，P＜0.05，差異顯著。
　　 2.PESV對HepG2肝癌生長的影響
　　 荷瘤對照組、PESV組和陽性對照組小鼠移植腫瘤的體積明顯增大。分別與荷瘤對照組相比，PESV組和陽性對照組對腫瘤體積的抑制作用較明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與荷瘤對照組相比，各給藥組小鼠的腫瘤重量明顯降低

5、，差異顯著。PESV組和陽性對照小鼠的瘤重分別為1.22±0.15g和0.80±0.22g。其中，陽性對照組對腫瘤的抑制作用最強，PESV對腫瘤組織也有較強的抑制作用，抑瘤率分別為63.51％和47.17％。
　　 3、PESV對腫瘤組織中VEGF、HPA、survlvin、CD34表達的影響
　　 免疫組織化學染色顯示，VEGF、HPA、survivin陽性產物呈棕黃色顆粒，主要定位于腫瘤細胞胞漿，CD34陽性產物表達

6、于腫瘤組織微血管內皮細胞，’經(jīng)半定量圖像分析，PESV組和陽性對照組腫瘤組織VEGF、HPA、survin表達明顯低于對照組(P＜0.05)。
　　 4、PESV對腫瘤組織中VEGF、HPA、survin蛋白表達的影響
　　 荷瘤對照組、PESV組和陽性對照組均可檢測到VEGF、HPA、survivin蛋白的表達，與荷瘤對照組相比，PESV組和陽性對照組VEGF、HPA、survivin蛋白水平均明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意