血管緊張素-（1-7）對(duì)脂多糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、生理性止血反應(yīng)的凝血過(guò)程和病理性血栓形成過(guò)程均是通過(guò)組織因子途徑實(shí)現(xiàn)的。組織因子(TF)是一種分子量為47 kD的單鏈跨膜糖蛋白，由263個(gè)氨基酸殘基組成。它既是FⅦ與FⅦa的受體，又是FⅦa催化活性的輔因子。組織因子途徑是指由TF啟動(dòng)的凝血過(guò)程，當(dāng)TF與FⅦa結(jié)合后，在Ca2+與磷脂存在條件下對(duì)FⅩ和FⅨ的激活。 脂多糖(LPS)是組成革蘭氏陰性菌(G)外壁的一種復(fù)合糖脂，具有廣泛的生物學(xué)作用。已知LPS可引起發(fā)熱反應(yīng)、白細(xì)胞

2、數(shù)目改變、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)和休克等。LPS是誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥介質(zhì)的最有效刺激物，它能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)產(chǎn)生炎癥因子如腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6等；同時(shí)也能直接和/或間接刺激VEC產(chǎn)生TF、粘附因子和生長(zhǎng)因子等。 腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是人體內(nèi)最重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，在維持人正常組織功能和疾病，尤其是心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展中都起了重要作用。近來(lái)許多研究顯示該系統(tǒng)中的新

3、成員血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]是在血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)2作用下由AngⅠ或AngⅡ生成的一個(gè)含有7個(gè)氨基酸殘基的多肽，在體內(nèi)發(fā)揮著舒張血管，調(diào)節(jié)水電解質(zhì)平衡和抑制細(xì)胞增殖等作用。但Ang-(1-7)是否能夠抑制LPS在促進(jìn)血栓形成方面的作用，能否通過(guò)抑制TF的升高進(jìn)而降低血栓性疾病的發(fā)生以及其具體機(jī)制至今尚未見報(bào)道。 研究目的: ①觀察LPS對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECs)TF表達(dá)的影響以

4、及Ang-(1-7)對(duì)其的干預(yù)作用； ②探討Ang-(1-7)抑制LPS誘導(dǎo)HUVECs TF表達(dá)的作用機(jī)制。 方法：HUVECs的培養(yǎng)采用DMEM完全培養(yǎng)基；MTT法測(cè)細(xì)胞活力；一期凝固法測(cè)總的細(xì)胞促凝活性；EIASA法測(cè)TF抗原；RT-PCR的方法檢測(cè)TF mRNA；免疫熒光化學(xué)觀察NF-κB的變化。 結(jié)果: ①與對(duì)照組相比，不同濃度的LPS(0.01～100 mg/L)能呈劑量依從性地促進(jìn)HUVEC

5、s促凝活性(PCA)和TF mRNA增加(r=0.963)，在10 mg/L達(dá)到峰值； ②單用Ang-(1-7)(10-8～10-5mol/L)對(duì)HUVECs PCA沒有影響。但在給予LPS之前30 min用Ang-(1-7)(10-8～10-5mol/L)預(yù)處理HUVECs，LPS(10 mg/L)刺激HUVECs表達(dá)TF的作用明顯受抑制，并存在顯著量效關(guān)系(r=-0.947)，在10-6mol/L時(shí)其抑制作用最強(qiáng)。10-6m

6、ol/L的Ang-(1-7)抑制LPS(10mg/L)對(duì)TF表達(dá)的刺激作用也呈時(shí)間依賴性，在8 h抑制作用最強(qiáng)。 ③一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L-NAME可明顯地阻抑Ang-(1-7)拮抗LPS促進(jìn)HUVECs PCA和TF mRNA增加的作用。 ④免疫熒光化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)LPS作用45min可引起HUVECs內(nèi)NF-κB從胞漿移入核內(nèi)；Ang-(1-7)預(yù)處理15min則可部分抑制LPS引起的HUVECs內(nèi)NF-κB的轉(zhuǎn)