血管緊張素-(1-7)對血管緊張素Ⅱ誘導的大鼠腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的:探討血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導的大鼠腎小管上皮細胞(NRK52E)表型轉(zhuǎn)化及細胞外基質(zhì)分泌的影響。
　　 方法:體外傳代培養(yǎng)NRK52E細胞,按2x105/ml濃度接種于六孔板中,按以下分組加入不同干預(yù)因素,Ang-(1-7)和AngⅡ終濃度均為10-6mol/L。①對照組:細胞培養(yǎng)基中不加干預(yù)因素,②AngⅡ組:細胞培養(yǎng)基中加入AngⅡ,③Ang-(1-7)組:細胞培養(yǎng)基中

2、加入Ang-(1-7),@AngⅡ+Ang-(1-7)組:細胞培養(yǎng)基中同時加入AngⅡ和Ang-(1-7)。按上述分組培養(yǎng)24h,48h,72h,96h后,進行如下檢測:(1)應(yīng)用細胞免疫化學染色法檢測細胞E-鈣粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達；(2)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測上清液中細胞外基質(zhì)成分Ⅰ型膠原(ColⅠ)和纖維粘連蛋白(FN)的含量；(3)收集細胞,抽提總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為c

3、DNA后采用實時熒光定量PCR(Real-timePCR)檢測細胞中E-cadherinmRNA,α-SMAmRNA,ColⅠmRNA和FNmRNA表達水平的變化。
　　 結(jié)果:(1)細胞免疫化學檢測結(jié)果:①腎小管上皮細胞α-SMA表達的變化:培養(yǎng)24h,48h,72h,96h后,對照組幾無α-SMA陽性表達的細胞,Ang-(1-7)組與之類似；AngⅡ組細胞隨培養(yǎng)時間延長α-SMA表達也增加,但24h,48h,72h與同時間點

4、對照組比較,均無統(tǒng)計學意義；96h時AngⅡ組細胞α-SMA表達較對照組顯著增加(P<0.05),AngⅡ+Ang-(1-7)8H與同時間點AngⅡ組比較,細胞α-SMA表達明顯減少(P<0.05)；②腎小管上皮細胞E-cadherin表達的變化:培養(yǎng)24h,48h,72h,96h后,對照組細胞E-cadherin表達無減少,Ang-(1-7)組與之類似；AngⅡ組細胞隨培養(yǎng)時間延長其E-cadherin表達逐漸減少,但24h,48h,

5、72h時與同時間點對照組比較,均無統(tǒng)計學意義；96h時AngⅡ組細胞與對照組比較,E-cadherin表達顯著減少(P<0.05),AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組比較,細胞E-cadherin表達明顯增加(P<0.05)。(2)ELISA檢測結(jié)果:培養(yǎng)72h后,Ang-(1-7)組與對照組比較,細胞上清液中ColⅠ和FN的含量無明顯改變,AngⅡ組與對照組比較,細胞上清液中ColⅠ和FN的含量增加,但無統(tǒng)計學意義；培養(yǎng)96h

6、后,Ang-(1-7)組與對照組比較,細胞上清液中ColⅠ和FN的含量無明顯改變,AngⅡ組與對照組比較,細胞上清液中ColⅠ和FN明顯升高(P<0.05)；與AngⅡ組比較,AngⅡ+Ang-(1-7)組細胞上清液中ColⅠ和FN含量明顯減少(P<0.05)。(3)Real-timePCR檢測結(jié)果:細胞培養(yǎng)96h后,與對照組比較,Ang-(1-7)組E-cadherinmRNA的表達無明顯改變,而AngⅡ組E-cadherinmRNA

7、的表達顯著減弱(P<0.05),與AngⅡ組比較,AngⅡ+Ang-(1-7)組E-cadherinmRNA的表達明顯增強(P<0.05):細胞培養(yǎng)96h后,與對照組比較,Ang-(1-7)組α-SMAmRNA、ColⅠmRNA和FNmRNA的表達無明顯改變,AngⅡ組α-SMAmRNA、ColⅠmRNA和FNmRNA表達顯著增強(P<0.05),與AngⅡ組比較,AngⅡ+Ang-(1-7)組α-SMAmRNA、ColⅠmRNA和FN